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摘要：目的 建立桑菊感冒片中桔梗皂苷D的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）法，色谱柱为Diamonsil C18柱（5 ?m，250 mm×4.6 mm），流动相为乙腈-水（25∶75），流速0.8 mL/min，ELSD漂移管温度105 ℃，载气（N2）流速2.5 L/min。结果 桔梗皂苷D在0.54～5.40 ?g范围内呈良好的线性关系（r=0.999 7），平均回收率为99.21%（n=5），RSD=0.97%。结论 本方法准确、可靠，重复性好，灵敏度高，可作为桑菊感冒片的质量控制标准。
关键词：桑菊感冒颗粒；桔梗皂苷D；含量测定；高效液相色谱-蒸发光散射检测器
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2012.03.021
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）03-0054-02
桑菊感冒片是由桔梗及桑叶、连翘等中药材制成的复方制剂，具有疏风清热、宣肺止咳之功效，用于治疗风热感冒初起诸症。桔梗是制剂中的主要成分，为了确保产品质量，保证临床用药安全有效，笔者参考2010年版《中华人民共和国药典》中桔梗药材含量测定方法，采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）法对桔梗的主要成分桔梗皂苷D进行定量研究，为桑菊感冒片的质量控制奠定基础。
1 仪器与试药
日本SCL-10A岛津高效液相色谱仪，Alltech 2000ES型蒸发光散射检测器，XWK-Ⅲ无油空气泵（天津市华生分析仪器厂）。
桔梗皂苷D（批号RFS-J-100810-01，成都瑞芬思生物科技有限公司）。乙腈（色谱纯，美国TEDIA公司），双蒸水，其他试剂均为分析纯。桑菊感冒片（批号100409、100802、100901），黑龙江省中医研究院制剂室生产。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18柱（5 ?m，250 mm×4.6 mm）；流动相：乙腈-水（25∶75）；柱温：30 ℃；流速：0.8 mL/min[1]；进样量：10 ?L；ELSD检测器检测参数：漂移管温度105 ℃，载气（N2）流速2.5 L/min[2-3]。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取桔梗皂苷D对照品5.4 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品，研成细粉，精密称取10.002 4 g，加75%乙醇80mL，水浴回流2 h，4 500 r/min离心15 min，倾出上清液，下层于水浴上挥干，再加75%乙醇80 mL，水浴回流2 h，离心，倾出上清液，合并，水浴挥至无醇味后加水30 mL溶解，过滤，滤液上AB-8大孔树脂柱（120 mm×10 mm）吸附后，依次用双蒸水、25%乙醇、50%乙醇洗脱，收集50%乙醇部分，浓缩至干，残渣用甲醇溶解，移入10 mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 ?m）滤过，取续滤液，即得[4]。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方称取不含桔梗的其他药材，按制剂工艺制备阴性样品，并按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2.3 专属性考察
精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，在上述色谱条件下测定，结果见图1。可见，该色谱条件下，桔梗皂苷D峰形良好，保留时间为33.732 min，阴性对照色谱在此处无假阳性峰，表明其他组分对测定无干扰。
2.4 线性关系考察
精密吸取上述对照品贮备液0.5、1、2、2.5 mL，分别置5 mL量瓶中，用甲醇定容，摇匀，得到浓度为54、108、216、270 ?g/mL的对照品溶液，与对照品贮备液一起分别标记为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ号溶液。按上述色谱条件，依次精密吸取10 ?L，进样分析，并以峰面积的自然对数值（Y）对进样量的自然对数值（X）进行线性回归，得到回归方程Y=7 042.7X+10 636（r=0.999 7）。表明桔梗皂苷D在0.54～5.40 ?g范围内呈良好的线性关系。
2.5 稳定性试验
取同一供试品溶液，室温放置，于0、2、4、6、8 h按上述色谱条件进样测定，以桔梗皂苷D峰面积计算RSD=1.03%。表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。
2.6 精密度试验
精密吸取同一桔梗皂苷D对照品溶液（0.54 mg/mL）10 ?L，按上述色谱条件重复进样6次，记录色谱图，以桔梗皂苷D峰面积计算RSD=0.72%。表明仪器精密度良好。
2.7 重复性试验
取同一批供试品（批号100901），分别制备5份供试品溶液，各精密吸取10 ?L，按上述色谱条件测定，记录色谱圖，计算供试品中桔梗皂苷D含量，RSD=1.05%。表明本法重复性良好。
2.8 加样回收率试验
取同一批供试品（批号100901）5份，精密称定，分别精密加入一定量的桔梗皂苷D对照品，按上述含量测定方法制备供试品溶液，进样测定，计算平均回收率及RSD值，结果见表1。表明本法回收率良好，方法可靠。
2.9 样品的含量测定
分别精密称取3个批号的桑菊感冒片细粉，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，各吸取10 ?L注入液相色谱仪中，按照“2.1”项下色谱条件测定，计算桔梗皂苷D含量，结果见表2。
3 讨论
桔梗味苦、辛，性平，归肺经，有宣肺、利咽、祛痰、排脓功效[1]。现代研究表明，桔梗中所含化学成分主要为五环三萜类的多糖苷，包括桔梗皂苷A、C、D、D2、D3，而桔梗皂苷D （Platycodin D）是桔梗皂苷中的主要皂苷[5]。药效学试验表明，桔梗皂苷D具有显著镇咳、祛痰作用[6]，与桔梗主治功效相符。
关键词：桑菊感冒颗粒；桔梗皂苷D；含量测定；高效液相色谱-蒸发光散射检测器
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2012.03.021
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）03-0054-02
桑菊感冒片是由桔梗及桑叶、连翘等中药材制成的复方制剂，具有疏风清热、宣肺止咳之功效，用于治疗风热感冒初起诸症。桔梗是制剂中的主要成分，为了确保产品质量，保证临床用药安全有效，笔者参考2010年版《中华人民共和国药典》中桔梗药材含量测定方法，采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）法对桔梗的主要成分桔梗皂苷D进行定量研究，为桑菊感冒片的质量控制奠定基础。
1 仪器与试药
日本SCL-10A岛津高效液相色谱仪，Alltech 2000ES型蒸发光散射检测器，XWK-Ⅲ无油空气泵（天津市华生分析仪器厂）。
桔梗皂苷D（批号RFS-J-100810-01，成都瑞芬思生物科技有限公司）。乙腈（色谱纯，美国TEDIA公司），双蒸水，其他试剂均为分析纯。桑菊感冒片（批号100409、100802、100901），黑龙江省中医研究院制剂室生产。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18柱（5 ?m，250 mm×4.6 mm）；流动相：乙腈-水（25∶75）；柱温：30 ℃；流速：0.8 mL/min[1]；进样量：10 ?L；ELSD检测器检测参数：漂移管温度105 ℃，载气（N2）流速2.5 L/min[2-3]。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取桔梗皂苷D对照品5.4 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品，研成细粉，精密称取10.002 4 g，加75%乙醇80mL，水浴回流2 h，4 500 r/min离心15 min，倾出上清液，下层于水浴上挥干，再加75%乙醇80 mL，水浴回流2 h，离心，倾出上清液，合并，水浴挥至无醇味后加水30 mL溶解，过滤，滤液上AB-8大孔树脂柱（120 mm×10 mm）吸附后，依次用双蒸水、25%乙醇、50%乙醇洗脱，收集50%乙醇部分，浓缩至干，残渣用甲醇溶解，移入10 mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 ?m）滤过，取续滤液，即得[4]。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方称取不含桔梗的其他药材，按制剂工艺制备阴性样品，并按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2.3 专属性考察
精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，在上述色谱条件下测定，结果见图1。可见，该色谱条件下，桔梗皂苷D峰形良好，保留时间为33.732 min，阴性对照色谱在此处无假阳性峰，表明其他组分对测定无干扰。
2.4 线性关系考察
精密吸取上述对照品贮备液0.5、1、2、2.5 mL，分别置5 mL量瓶中，用甲醇定容，摇匀，得到浓度为54、108、216、270 ?g/mL的对照品溶液，与对照品贮备液一起分别标记为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ号溶液。按上述色谱条件，依次精密吸取10 ?L，进样分析，并以峰面积的自然对数值（Y）对进样量的自然对数值（X）进行线性回归，得到回归方程Y=7 042.7X+10 636（r=0.999 7）。表明桔梗皂苷D在0.54～5.40 ?g范围内呈良好的线性关系。
2.5 稳定性试验
取同一供试品溶液，室温放置，于0、2、4、6、8 h按上述色谱条件进样测定，以桔梗皂苷D峰面积计算RSD=1.03%。表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。
2.6 精密度试验
精密吸取同一桔梗皂苷D对照品溶液（0.54 mg/mL）10 ?L，按上述色谱条件重复进样6次，记录色谱图，以桔梗皂苷D峰面积计算RSD=0.72%。表明仪器精密度良好。
2.7 重复性试验
取同一批供试品（批号100901），分别制备5份供试品溶液，各精密吸取10 ?L，按上述色谱条件测定，记录色谱圖，计算供试品中桔梗皂苷D含量，RSD=1.05%。表明本法重复性良好。
2.8 加样回收率试验
取同一批供试品（批号100901）5份，精密称定，分别精密加入一定量的桔梗皂苷D对照品，按上述含量测定方法制备供试品溶液，进样测定，计算平均回收率及RSD值，结果见表1。表明本法回收率良好，方法可靠。
2.9 样品的含量测定
分别精密称取3个批号的桑菊感冒片细粉，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，各吸取10 ?L注入液相色谱仪中，按照“2.1”项下色谱条件测定，计算桔梗皂苷D含量，结果见表2。
3 讨论
桔梗味苦、辛，性平，归肺经，有宣肺、利咽、祛痰、排脓功效[1]。现代研究表明，桔梗中所含化学成分主要为五环三萜类的多糖苷，包括桔梗皂苷A、C、D、D2、D3，而桔梗皂苷D （Platycodin D）是桔梗皂苷中的主要皂苷[5]。药效学试验表明，桔梗皂苷D具有显著镇咳、祛痰作用[6]，与桔梗主治功效相符。