【摘 要】
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目的 构建SLC25A5基因的真核表达载体,同时验证该基因与肝癌细胞生长之间的关系.方法 以人乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增出SLC25A5的CDS区编码序列,应用双酶切将PCR产物插
【机 构】
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哈尔滨医科大学大庆校区医学检验与技术学院,黑龙江大庆 163319;军事科学院军事医学研究院生物工程研究所细胞工程研究室,北京100850
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目的 构建SLC25A5基因的真核表达载体,同时验证该基因与肝癌细胞生长之间的关系.方法 以人乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增出SLC25A5的CDS区编码序列,应用双酶切将PCR产物插入到带Flag标签的pCMV?Tag2B载体上,酶切和测序验证后转染到人肝癌HepG2细胞中,通过Western印迹检测其表达情况,CCK?8法、克隆形成实验测定其对肝癌HepG2细胞生长的影响.结果 双酶切结果显示,pCMV?Tag2B?Flag?SLC25A5真核表达载体构建成功;提取质粒转染人肝癌HepG2细胞;Western印迹技术验证该基因蛋白成功表达;CCK?8法和克隆形成实验证明过表达pCMV?Tag2B?Flag?SLC25A5促进肝癌HepG2细胞增殖.结论 pCMV?Tag2B?Flag?SLC25A5真核表达载体构建成功,并证明其可促进肝癌细胞增殖,为进一步研究SLC25A5在肝癌中的发生发展作用奠定了基础.
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