【摘 要】
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目的 探讨牙髓干细胞来源胞外囊泡（DPSC-EV）对γ射线导致小鼠骨髓细胞凋亡的抑制作用及机制。方法 使用超速离心法从DPSC中分离DPSC-EV，用Western印迹法鉴定其表面标志物，用纳米颗粒跟踪分析技术（NTA）检测DPSC-EV颗粒数目及粒径大小。细胞处理：（1）60Co γ射线照射小鼠骨髓细胞FDC-P1，单次照射剂量分别为0,2和6 Gy，实验时间为照射后24和48 h;（2） FD
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目的 探讨牙髓干细胞来源胞外囊泡（DPSC-EV）对γ射线导致小鼠骨髓细胞凋亡的抑制作用及机制。方法 使用超速离心法从DPSC中分离DPSC-EV，用Western印迹法鉴定其表面标志物，用纳米颗粒跟踪分析技术（NTA）检测DPSC-EV颗粒数目及粒径大小。细胞处理：（1）60Co γ射线照射小鼠骨髓细胞FDC-P1，单次照射剂量分别为0,2和6 Gy，实验时间为照射后24和48 h;（2） FDC-P1细胞经60Co γ射线2和6 Gy照射后立即加入DPSC-EV(终浓度5×1011L-1)干预24 h;（3） FDC-P1细胞转染微RNA（miRNA）抑制剂后进行2 Gy照射并立即加入DPSC-EV(终浓度5×1011L-1)干预24 h;（4） FDC-P1细胞转染miRNA模拟物后进行2 Gy照射，继续培养24 h。用流式细胞术检测细胞凋亡率，Western印迹法检测胱天蛋白酶3、活化胱天蛋白酶3、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）和活化PARP蛋白表达水平，逆转录实时定量PCR检测细胞miR-100-5p表达水平。结果 （1）与细胞对照组相比，60Co γ射线2和6 Gy照射后24和48 h,FDC-P1细胞凋亡率均显著升高（P＜0.01），细胞中胱天蛋白酶3和PARP蛋白活化水平均显著升高（P＜0.05,P＜0.01）。（2）照射后加DPSC-EV处理24 h,FDC-P1细胞凋亡率较2和6 Gy单纯照射组均明显降低（P＜0.01）,PARP蛋白活化水平显著降低（P＜0.05,P＜0.01）。（3）经γ射线2 Gy照射后24 h,FDC-P1细胞miR-100-5p表达水平与细胞对照组比较显著降低（P＜0.01）,DPSC-EV干预可逆转2 Gy照射导致的miR-100-5p表达水平降低（P＜0.01）；转染miR-100-5p抑制剂后，FDC-P1细胞经2 Gy照射并加入DPSC-EV后，与抑制剂对照组相比，细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）;（4）转染miR-100-5p模拟物后，2 Gy照射，与模拟物对照组相比，FDC-P1细胞凋亡率明显降低（P＜0.01）。结论 DPSC-EV可能通过上调骨髓细胞中miR-100-5p表达水平而抑制γ射线所致小鼠骨髓细胞凋亡。
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