【摘 要】
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硫氧还原蛋白的第38位Met突变为Ala的Trx-sCT-Gly基因在E.coliBL21(DE3)中得到高效表达.用ThioBind亲和树脂纯化表达的融合蛋白.结果说明38位的Met突变为Ala不影响融合蛋白与
【机 构】
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中国医学科学院,中国协和医科大学,基础医学研究所,北京,100005
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硫氧还原蛋白的第38位Met突变为Ala的Trx-sCT-Gly基因在E.coliBL21(DE3)中得到高效表达.用ThioBind亲和树脂纯化表达的融合蛋白.结果说明38位的Met突变为Ala不影响融合蛋白与树脂的特异性结合,融合蛋白的纯度达90%以上.在含有3mol/L尿素的70%甲酸中,室温48h,至少80%融合蛋白被溴化氰裂解开.采用CM-纤维素吸附,用稀盐酸解吸附,得到纯度为92%的降钙素前体多肽sCT-Gly.氨基酸的序列分析结构表明,重组sCT-Gly的N端10个氨基酸与预期一致.在强酸性条件下,没有发生氨基酸的脱酰胺反应,氨基酸组成分析与预期基本一致.质谱法测定的分子量为3492,毛细管电泳测定的等电点pⅠ为6.46,大鼠降钙素比活性为190IU/mg左右,与天然的人降钙素相当.
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