【摘 要】
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背景与目的SYBR Green Ⅰ是一种较为常用的非探针类定量PCR的方法,其主要优点在于操作过程简单,结果具有一定特异性.本研究的目的是建立检测色素上皮衍生因子(pigment epithe
【机 构】
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100036,北京大学临床肿瘤学院、北京肿瘤医院外科;北京大学医学部肿瘤中心实验室;英国加的夫大学威尔士医学院外科,转移及血管生成研究室;
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背景与目的SYBR Green Ⅰ是一种较为常用的非探针类定量PCR的方法,其主要优点在于操作过程简单,结果具有一定特异性.本研究的目的是建立检测色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)mRNA的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR的方法,了解肺癌组织及其远癌肺组织中PEDF的表达水平,研究肺癌组织中PEDF的表达水平与各种临床病理特征之间的关系.方法利用RT-PCR的方法扩增并纯化PEDF以及内对照GAPDH mRNA的目的片段,倍比稀释后作为定量模板.利用相对定量的方法,检测21例肺癌及相应远癌肺组织中PEDF mRNA相对于GAPDH mRNA的表达量,进行相对定量分析.结果21例肺癌组织及相应的远癌肺组织中均可检出PEDF的表达,肺癌组织中PEDF的相对表达量为0.5505±0.3590(0.11～1.11),远癌肺组织中为0.7219士0.2582(0.29～1.31)(P=0.024).早期(Ⅰ～Ⅱ期)肺癌患者和肿瘤较小时(T1)PEDF的表达量显著高于晚期(Ⅲ～Ⅳ期,P=0.010)和肿瘤较大者(T2～4,P=0.007).结论所建立的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法可以成功地检测PEDF基因的表达量.初步检测结果显示PEDF可能是一种肺癌发生发展过程中的保护因素.
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