【摘 要】
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目的观察转染后CD44+肺癌干细胞内PKM2基因的表达变化及其对CD44+肺癌干细胞增殖、耐药性的影响。方法将A549肺癌细胞株继代培养后,采取免疫磁珠细胞分选法,通过Auto MACS仪
【机 构】
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江西省肿瘤医院,日本国立长崎大学干细胞研究室
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目的观察转染后CD44+肺癌干细胞内PKM2基因的表达变化及其对CD44+肺癌干细胞增殖、耐药性的影响。方法将A549肺癌细胞株继代培养后,采取免疫磁珠细胞分选法,通过Auto MACS仪器,分选出CD44+细胞。实验分为实验组和对照组,将人工合成的针对PKM2基因的siRNA片段通过Lipofectamine 2000转染细胞,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)和Western blot法检测各组细胞中PKM2的mRNA和蛋白质的表达量,细胞免疫组化染色分析CD44及PKM2表达,并采用MTT法检测各组细胞的增殖活力。药性敏感性试验:在培养基内添加不同浓度化疗药物DDP,并通过MTT assay测试细胞的生长及增殖速度。结果 CD44+肺癌干细胞转染PKM2 siRNA后,CD44+肺癌干细胞中PKM2 mRNA及蛋白表达减弱(P<0.05),细胞增殖能力减弱,抗肿瘤药物耐药性降低。结论 PKM2对CD44+肺癌干细胞的增殖起促进作用,同时具有增强抗肿瘤药物耐药性的作用。
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