【摘 要】
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目的 探讨清瘟败毒饮调控小鼠肺泡巨噬细胞自噬减轻脓毒症肺损伤的机制。方法 将60只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、清瘟败毒饮低、中、高剂量组及地塞米松组，每组10只。采用腹腔注射脂多糖（LPS）建立脓毒症肺损伤动物模型。清瘟败毒饮各剂量组每天分别予607.75、1 215.5、2 431 mg/kg灌胃，每日1次；地塞米松组予尾静脉注射地塞米松1.3 mg/kg，每日1次；空白
【机 构】
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湖南中医药大学第一附属医院重症医学科
【基金项目】
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湖南省中医药科研计划项目青年基金（No.2021175）； 湖南省卫健委一般项目（No.202117011236）； 湖南中医药大学校级科研联合基金一般项目（No.2020XJJJ041）；
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目的 探讨清瘟败毒饮调控小鼠肺泡巨噬细胞自噬减轻脓毒症肺损伤的机制。方法 将60只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、清瘟败毒饮低、中、高剂量组及地塞米松组，每组10只。采用腹腔注射脂多糖（LPS）建立脓毒症肺损伤动物模型。清瘟败毒饮各剂量组每天分别予607.75、1 215.5、2 431 mg/kg灌胃，每日1次；地塞米松组予尾静脉注射地塞米松1.3 mg/kg，每日1次；空白组予以等量生理盐水腹腔注射，模型组予以腹腔注射生理盐水，干预时间均为1周。实验结束时，用HE染色观察小鼠肺组织的病理学改变，计算肺组织病理学评分，取肺组织称重测定湿重/干重比，蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测小鼠肺组织中Toll样受体4（TLR4）、核因子-κB（NF-κB）、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）、自噬相关蛋白beclin-1的蛋白表达水平，电子显微镜观察肺泡巨噬细胞超微结构。结果 光镜示空白组小鼠肺组织肺泡壁光滑，结构清晰完整，肺泡腔无渗出。模型组小鼠肺泡腔内大量红细胞和炎性细胞浸润，肺泡间隔及肺泡壁增厚，部分肺泡腔塌陷，肺组织病理学评分和肺组织湿重/干重比较空白组明显升高（P＜0.01）。与模型组比较，清瘟败毒饮各剂量组及地塞米松组小鼠肺组织水肿和炎性浸润均减轻，肺组织结构破坏改善，肺组织病理学评分和肺组织湿重/干重比明显降低（P＜0.05,P＜0.01）。与清瘟败毒饮低剂量组比较，清瘟败毒饮中、高剂量组和地塞米松组的小鼠肺组织水肿和炎性浸润进一步减轻，肺组织结构破坏改善，肺组织病理学评分和肺组织湿重/干重比明显降低（P＜0.05,P＜0.01）。透射电镜示空白组肺泡巨噬细胞超微结构正常，模型组肺泡巨噬细胞皱缩、胞质饱满度降低，游离面微绒毛变短、稀疏、排列不整齐，胞质内很少有自噬小体形成，线粒体嵴消失，板层小体破溃，可见细胞核固缩、核碎裂及核溶解。与模型组比较，清瘟败毒饮各剂量组和地塞米松组的肺泡巨噬细胞形态及细胞内超微结构均明显改善。与空白组比较，模型组TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达显著增加（P＜0.01）,LC3-Ⅱ、beclin-1蛋白表达显著降低（P＜0.01）。与模型组比较，清瘟败毒饮各剂量组及地塞米松组TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达显著降低（P＜0.05,P＜0.01）,LC3-Ⅱ、beclin-1蛋白表达显著增加（P＜0.05,P＜0.01）。与清瘟败毒饮低剂量组比较，清瘟败毒饮中、高剂量组及地塞米松组TLR4、NF-κB、NLRP3的蛋白表达显著降低（P＜0.05,P＜0.01）,LC3-Ⅱ、beclin-1的蛋白表达显著增加（P＜0.05,P＜0.01）。结论 清瘟败毒饮对脓毒症小鼠肺损伤有保护作用，其机制可能是通过抑制TLR4/NF-κB信号通路，增加小鼠肺泡巨噬细胞自噬来实现的。
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