【摘 要】
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目的 通过体外研究黄连素(BBR)对人肝癌细胞株 HepG2肝药酶CYP3A4在 mRNA及蛋白水平表达的影响和在大鼠体内研究BBR对大鼠肝药酶CYP3A的底物咪达唑仑(MDZ)的药物代谢动力学(药动学)的影响,初步探讨 BBR 对 CYP3A 的体内外作用以及其是否存在相关性.方法 体外实验用系列质量浓度BBR组、空白对照组分别与对数生长期人肝癌 HepG2细胞孵育48h后,提取细胞 RNA 和总蛋白,分别采用荧光定量 PCR 法(qRT-PCR)、Western Blot 法检测 HepG2细胞中 C
【机 构】
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四川省宜宾市第一人民医院药学部,宜宾 644000;中国人民解放军武汉总医院临床药理科,武汉 430070;四川省宜宾市第一人民医院药学部,宜宾 644000;中国人民解放军武汉总医院临床药理科,武汉
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目的 通过体外研究黄连素(BBR)对人肝癌细胞株 HepG2肝药酶CYP3A4在 mRNA及蛋白水平表达的影响和在大鼠体内研究BBR对大鼠肝药酶CYP3A的底物咪达唑仑(MDZ)的药物代谢动力学(药动学)的影响,初步探讨 BBR 对 CYP3A 的体内外作用以及其是否存在相关性.方法 体外实验用系列质量浓度BBR组、空白对照组分别与对数生长期人肝癌 HepG2细胞孵育48h后,提取细胞 RNA 和总蛋白,分别采用荧光定量 PCR 法(qRT-PCR)、Western Blot 法检测 HepG2细胞中 CYP3A4mRNA水平和蛋白水平的表达.体内实验以不同质量浓度的BBR组作为实验组,实验组与空白对照组大鼠分别连续灌胃 10d后,进行大鼠腹股沟动脉插管采血,以底物 MDZ作为CYP3A的探针,采用高效液相色谱法(HPLC)测定大鼠血浆中 MDZ及其代谢物1\'-羟基咪达唑仑(1\'-O H-MDZ)的质量浓度,以研究MDZ在大鼠体内的代谢.结果 qRT-PCR法分析结果表明,与空白对照组比较,10、20、40μg·mL-1BBR均对 HepG2细胞CYP3A4的mRNA表达有显著抑制作用(P＜0.05);Western Blot结果表明,与空白对照组比较,0.1、0.5、2.0μg·mL-1BBR 对 HepG2细胞 CYP3A4蛋白的表达有诱导作用(P＜0.05),但 10、40μg·mL-1BBR对 HepG2细胞CYP3A4蛋白的表达有显著抑制作用(P＜0.01).在体内,大鼠口服不同质量浓度药物后MDZ的主要药动学参数为:空白对照组、BBR 50mg·kg-1组、BBR 100mg·kg-1组、 BBR 200mg·kg-1组和阳性对照酮康唑75mg·kg-1组的药时曲线下面积(AUC (0～t))分别为(1.25±0.29)、(1.69±0.31)、(2.03±0.44)、(2.12±0.66)、(2.47±0.49) μg·mL-1·h;血药达峰质量浓度(Cmax)分别为 (1.13±0.25)、(1.69±0.23)、(1.84±0.29)、(2.12±0.53)、(2.21±0.29) μg·mL-1.各组1\'-OH-MDZ的主要药动学参数为:AUC (0～t)分别为(0.66±0.28)、(0.46±0.19)、(0.42±0.11)、(0.36±0.09)、(0.37± 0.10) μg·mL-1·h;Cmax 分别为(0.51±0.16)、(0.44±0.13)、(0.40±0.08)、(0.32±0.07)、(0.33±0.09) μg·mL-1.结论 在体外BBR对CYP3A有双向作用,低剂量时诱导,高剂量时抑制;在大鼠体内 BBR可显著抑制 MDZ的代谢,该抑制作用很有可能是BBR抑制了CYP3A酶的活性,黄连素对CYP3A在体、内外作用存在一定的相关性,但并不完全一致.
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