【摘 要】
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目的研究SARS冠状病毒E蛋白对SARS诊断和预防的价值,利用原核表达系统克隆和表达E蛋白并纯化. 方法采用RT- PCR从SARS冠状病毒RNA中扩增出编码E蛋白的基因;经克隆和测序分析
【机 构】
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华中科技大学同济医学院,深圳市疾病预防控制中心
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目的研究SARS冠状病毒E蛋白对SARS诊断和预防的价值,利用原核表达系统克隆和表达E蛋白并纯化. 方法采用RT- PCR从SARS冠状病毒RNA中扩增出编码E蛋白的基因;经克隆和测序分析后,亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌BL21(DE3),PCR和双酶切鉴定;阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,进一步以SARS病人血清进行免疫印迹分析;大量诱导表达E蛋白,亲和层析予以纯化. 结果 RT-PCR扩增出E蛋白基因的特异片段,获得的阳性克隆序列与Gen Bank中登录的SARS冠状
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