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【摘要】目的研究抑癌基因p53及凋亡抑制因子Survivin在子宫内膜腺肌症中的异常表达，探讨其形成的原因。方法以30例子宫内膜异位症患者为研究组，取其异位内膜和在位内膜(未孕17例、已孕19例)，以同期30例正常子宫内膜标本为对照组。应用Western Blot检测p53以及Survivin在异位内膜、在位内膜和正常子宫内膜组织中的表达。用统计软件SPSS13.0对检测结果进行统计学分析，P＜0.05为差异有显著性。结果在正常子宫内膜、在位内膜（已孕）、在位内膜（未孕）、异位内膜p53蛋白的阳性表达量呈逐渐增加,其中子宫内膜异位症中的在位内膜、异位内膜与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)，在位内膜（已孕）、在位内膜（未孕）两组无明显差异(P>0.05)。在正常子宫内膜、在位内膜（已孕）、在位内膜（未孕）、异位内膜蛋白的阳性Survivin表达量逐渐增加。子宫内膜异位症中的在位内膜、异位内膜与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)，异位内膜、在位内膜（未孕）与正常内膜相比差异具显著性(P>0.05)。
【关键词】子宫内膜异位症；Survivin；p53
子宫内膜异位症是一种严重影响妇女健康的疾病, 近年来发病率逐增加，在妇科剖腹手术中，约5%～15％患者发现有此病；因不孕而行腹腔镜患者中，12%～48％有内膜异位症，一般仅见于生育年龄妇女， 25～45岁妇女居多。发病机制尚未完全明确，临床上尚无有效的根治疗法。子宫内膜异位症虽为良性病变，但具有类似恶性肿瘤的侵袭性、种植性和复发性。从肿瘤发生的角度探讨病因，认为患者异位增殖能力增强是由异位内膜凋亡减弱引起,推测子宫内膜异位症的发生、发展可能与凋亡调控基因有关。Survivin是一种凋亡抑制基因，1997年由Ambrosin i等人[1]利用效应细胞蛋白酶受体-1的cDNA与人类基因库杂交分离得到，其定位于人染色体17q25，是目前发现最强的凋亡抑制因子。Survivin功能复杂，具有抑制细胞凋亡和参与细胞的有丝分裂、血管的生成。p53是一种肿瘤抑制基因，产物主要存于细胞核内。p53诱导细胞凋亡是抑制肿瘤发生的原因之一。通过对子宫内膜异位症中的Survivin和p53蛋白进行检测，探讨与子宫内膜异位症的发生、发展及恶变的关系，明确其形成的病因。
1材料与方法
1.1研究对象选取2010 年3 月~2011 年5月本院病理检查确诊的卵巢子宫内膜异位症患者30例，年龄36~50 岁，平均45 岁，同时刮取在位内膜共36 例；另取同期非子宫内膜异位症的正常人自愿刮宫所取正常子宫内膜组织30例，年龄35~50 岁，平均42 岁；并选取2010 年3 月~2011 年5 年期间本院经病理检查确诊为同期取因子宫肌瘤行子宫切除术的正常在位子宫内膜作为对照组，共26例，排除半年内使用过激素的病例。
1.2实验方法Western Blot 检测蛋白变化。一抗: 鼠抗人survivin单克隆抗体。二抗: 生物素标记羊抗小鼠IgG。一抗4℃封闭过夜，二抗(辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体(1：1000) 孵育1h，化学发光法显示结果。
1.3实验结果判定目的条带与β-Actin条带灰度值比值，将正常子宫内膜与β-Actin的比值设为1.00，取3次结果的平均值。
1.4统计学分析数据采用均数±标准差（χ±s）表示，应用SPSS 13.0软件处理。所用统计分析方法为χ2检验。p＜0.05、p＜0.01为差异有统计学意义。
2实验结果
实验结果显示：在正常子宫内膜、在位内膜（已孕）、在位内膜（未孕）、异位内膜p53蛋白的阳性表达量逐渐增加,其中子宫内膜异位症中的在位内膜、异位内膜与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)，在位内膜（已孕）、在位内膜（未孕）两组无明显差异(P>0.05)。在正常子宫内膜、在位内膜（已孕）、在位内膜（未孕）、异位内膜蛋白的阳性Survivin表达量逐渐增加。子宫内膜异位症中的在位内膜、异位内膜与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)，异位内膜、在位内膜（未孕）与正常内膜相比差异具显著性(P>0.05)。
表1.p53 、Survivin在正常子宫内膜、EMs在位及异位内膜中的表达量
*p<0.05与对照组比较 ，**p<0.01与对照组比较
3讨论
Survivin是一种凋亡抑制基因，具有抑制细胞凋亡和促进细胞增殖两种作用，与肿瘤的发生、发展密切相关[2]。目前已明确肿瘤的生成和发展依赖于血管。实验结果显示，子宫内膜异位症异位内膜中Survivin蛋白表达量较高，明显高于正常在位子宫内膜的表达量，两组之间的蛋白表达差异有统计学意义。Survivin基因在子宫内膜异位症中高表达，说明Survivin基因可抑制异位内膜细胞凋亡,导致异位内膜细胞的增殖失控，毛细血管网形成，促使异位内膜出现类似恶性肿瘤的侵袭性生长，因此Survivin 基因可能在子宫内膜异位症侵袭性的发生及发展中起重要作用。p53是一种肿瘤抑制基因，其表达产物p53蛋白半衰期很短，不易在组织或细胞中检测到。突变型p53蛋白半衰期比较长，并可在组织或细胞中堆积，易被Western Blot方法检测到。在严重的子宫内膜异位症中普遍存在p53基因的缺失，p53的体细胞突变参与了内异症的演变过程。实验发现，p53在异位子宫内膜表达量较高，存在着突变型p53蛋白。经血逆流后或逆流过程中，子宫内膜碎片中p53由于种种原因发生了突变。逆流的子宫内膜存在凋亡抑制，使子宫内膜异位得以存活种植，过度增生。证实，突变型p53能增强VEGF 表达，p53也可能通过凋亡抑制及促进血管形成的机制参与了内异症。
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【关键词】子宫内膜异位症；Survivin；p53
子宫内膜异位症是一种严重影响妇女健康的疾病, 近年来发病率逐增加，在妇科剖腹手术中，约5%～15％患者发现有此病；因不孕而行腹腔镜患者中，12%～48％有内膜异位症，一般仅见于生育年龄妇女， 25～45岁妇女居多。发病机制尚未完全明确，临床上尚无有效的根治疗法。子宫内膜异位症虽为良性病变，但具有类似恶性肿瘤的侵袭性、种植性和复发性。从肿瘤发生的角度探讨病因，认为患者异位增殖能力增强是由异位内膜凋亡减弱引起,推测子宫内膜异位症的发生、发展可能与凋亡调控基因有关。Survivin是一种凋亡抑制基因，1997年由Ambrosin i等人[1]利用效应细胞蛋白酶受体-1的cDNA与人类基因库杂交分离得到，其定位于人染色体17q25，是目前发现最强的凋亡抑制因子。Survivin功能复杂，具有抑制细胞凋亡和参与细胞的有丝分裂、血管的生成。p53是一种肿瘤抑制基因，产物主要存于细胞核内。p53诱导细胞凋亡是抑制肿瘤发生的原因之一。通过对子宫内膜异位症中的Survivin和p53蛋白进行检测，探讨与子宫内膜异位症的发生、发展及恶变的关系，明确其形成的病因。
1材料与方法
1.1研究对象选取2010 年3 月~2011 年5月本院病理检查确诊的卵巢子宫内膜异位症患者30例，年龄36~50 岁，平均45 岁，同时刮取在位内膜共36 例；另取同期非子宫内膜异位症的正常人自愿刮宫所取正常子宫内膜组织30例，年龄35~50 岁，平均42 岁；并选取2010 年3 月~2011 年5 年期间本院经病理检查确诊为同期取因子宫肌瘤行子宫切除术的正常在位子宫内膜作为对照组，共26例，排除半年内使用过激素的病例。
1.2实验方法Western Blot 检测蛋白变化。一抗: 鼠抗人survivin单克隆抗体。二抗: 生物素标记羊抗小鼠IgG。一抗4℃封闭过夜，二抗(辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体(1：1000) 孵育1h，化学发光法显示结果。
1.3实验结果判定目的条带与β-Actin条带灰度值比值，将正常子宫内膜与β-Actin的比值设为1.00，取3次结果的平均值。
1.4统计学分析数据采用均数±标准差（χ±s）表示，应用SPSS 13.0软件处理。所用统计分析方法为χ2检验。p＜0.05、p＜0.01为差异有统计学意义。
2实验结果
实验结果显示：在正常子宫内膜、在位内膜（已孕）、在位内膜（未孕）、异位内膜p53蛋白的阳性表达量逐渐增加,其中子宫内膜异位症中的在位内膜、异位内膜与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)，在位内膜（已孕）、在位内膜（未孕）两组无明显差异(P>0.05)。在正常子宫内膜、在位内膜（已孕）、在位内膜（未孕）、异位内膜蛋白的阳性Survivin表达量逐渐增加。子宫内膜异位症中的在位内膜、异位内膜与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)，异位内膜、在位内膜（未孕）与正常内膜相比差异具显著性(P>0.05)。
表1.p53 、Survivin在正常子宫内膜、EMs在位及异位内膜中的表达量
*p<0.05与对照组比较 ，**p<0.01与对照组比较
3讨论
Survivin是一种凋亡抑制基因，具有抑制细胞凋亡和促进细胞增殖两种作用，与肿瘤的发生、发展密切相关[2]。目前已明确肿瘤的生成和发展依赖于血管。实验结果显示，子宫内膜异位症异位内膜中Survivin蛋白表达量较高，明显高于正常在位子宫内膜的表达量，两组之间的蛋白表达差异有统计学意义。Survivin基因在子宫内膜异位症中高表达，说明Survivin基因可抑制异位内膜细胞凋亡,导致异位内膜细胞的增殖失控，毛细血管网形成，促使异位内膜出现类似恶性肿瘤的侵袭性生长，因此Survivin 基因可能在子宫内膜异位症侵袭性的发生及发展中起重要作用。p53是一种肿瘤抑制基因，其表达产物p53蛋白半衰期很短，不易在组织或细胞中检测到。突变型p53蛋白半衰期比较长，并可在组织或细胞中堆积，易被Western Blot方法检测到。在严重的子宫内膜异位症中普遍存在p53基因的缺失，p53的体细胞突变参与了内异症的演变过程。实验发现，p53在异位子宫内膜表达量较高，存在着突变型p53蛋白。经血逆流后或逆流过程中，子宫内膜碎片中p53由于种种原因发生了突变。逆流的子宫内膜存在凋亡抑制，使子宫内膜异位得以存活种植，过度增生。证实，突变型p53能增强VEGF 表达，p53也可能通过凋亡抑制及促进血管形成的机制参与了内异症。
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