【摘 要】
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目的 观察在脂质引起佛波酯(PMA)促分化后人单核细胞源性巨噬细胞(THP-1)凋亡中有无内质网(ER)应激,探讨巨噬细胞凋亡在慢性肾脏疾病并发加速进展的动脉粥样硬化和心血管事件
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医院肾内科,北京,100730
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目的 观察在脂质引起佛波酯(PMA)促分化后人单核细胞源性巨噬细胞(THP-1)凋亡中有无内质网(ER)应激,探讨巨噬细胞凋亡在慢性肾脏疾病并发加速进展的动脉粥样硬化和心血管事件中的作用.方法 密度梯度法提取低密度脂蛋白,制备乙酰化低密度脂蛋白(ACLDL).Hoechst染色定量计数凋亡细胞比例.easpase3,7活性测定检测凋亡.油红O染色观察细胞内脂滴变化.酶学反应法测定细胞内游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量.Western印迹和实时定量PCR测定细胞乙酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶(ACAT)、生长停滞及DNA损伤基因(CHOP)和Bcl-2的表达.结果 ACLDL呈剂量依赖和时间依赖促进细胞凋亡.100 mg/L ACLDL与THP-1巨噬细胞作用24 h,油红O染色下细胞内脂滴显著增多,细胞内FC和CE含量显著增加(P＜0.01).Western印迹显示,ACLDL 100 mg/L作用3～24 h,ACAT1、CHOP表达较作用前持续升高,Bcl-2表达持续降低.实时定量PCR显示,ACLDL作用12～24 h,较作用前促进CHOP mRNA表达(P＜0.01),抑制Bcl-2 mRNA表达(P＜0.01);ACLDL作用24 h点,较无ACLDL作用组促进CHOP mRNA表达(P＜0.01),抑制Bcl-2mRNA表达(P＜0.01),但对ACAT1表达没有影响.结论 在ACLDL引起的THP-1巨噬细胞凋亡中存在ER应激.
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