四环素诱导可控表达细胞周期素B1单克隆的筛选

• 作 者: 何乐亚 魏欣 左学良 田铭 张永红 于冬冬 董硕 陶德定 胡
• 机 构: 华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤研究所
• 出 处: 医学分子生物学杂志
• 发表日期: 2009年4期
• 关键词: 细胞周期素B1 四环素 单克隆 T-RExr^TM-293 cyelin B1 tetracycline monoclonal cell line T-
• 基金项目: 国家重点基础研究发展规划项目（973计划）子课题（No.2004CB518705,2009CB521802）,国家自然科学基金（No.30872472,30800569）,新世纪人才支持计划（No.NCET-04-0699）

目的筛选四环素诱导细胞周期素B1（CyclinB1）可控表达的293单克隆细胞株（tetracycline-regulated expression 293 cells，T-REx^TM-293）。方法从人胎肝cDNA文库中PCR带有酶切位点的CyclinB1基因全长，将其酶切后插入到pcDNA4／TO／myc-HisB载体中。然后用测序正确的质粒转染T-RExTM-293细胞，加杀稻瘟菌素（Blasticidin）和腐草霉素（Zeocirt）双药物筛选两周后，传96孔板，等单个细胞扩增出单克隆。然后用W