肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体及其Ⅰ型受体单克隆抗体联合体内外抗肿瘤作用

• 作 者: 黄晶晶 孙欣 李亚英 韩晓建 金艾顺
• 机 构: 150081 哈尔滨医科大学基础医学院免疫教研室,150081 哈尔滨医科大学基础医学院免疫教研室,150081 哈尔滨医科大学基础医学院免疫教研室,150081 哈尔滨医科大学基础医学院免疫教研室,
• 出 处: 国际免疫学杂志
• 发表日期: 2018年41期
• 关键词: Tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand-receptor-1 Monoclonal an

目的

建立高效表达肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体( tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand，TRAIL)单克隆抗体和TRAIL蛋白的方法，并验证抗体TR1-419与TRAIL的体内外联合抗肿瘤作用。

方法

利用Expi293蛋白表达系统表达抗体，采用Protein G进行抗体蛋白的纯化。利用原核表达系统表达SUMO-Strep-TRAIL蛋白并通过Ni^2＋柱及Strep两步亲和层析获得高纯度的TRAIL蛋白。流式细胞术检测抗体与肿瘤细胞表面TRAIL-R1的特异性结合能力。采用MTT法验证制备的TRAIL联合TR1-419单抗蛋白对肿瘤细胞的杀伤活性。通过Western blot初步检测TRAIL联合TR1-419抗体体外杀伤肿瘤的机制。建立裸鼠肿瘤模型，验证TRAIL联合TR1-419体内抗肿瘤作用。

结果

成功建立了Expi293抗体蛋白高效表达系统及TRAIL蛋白原核表达系统。TR1-419单抗特异性结合表达TRAIL-R1的HeLa细胞；TRAIL显示抗肿瘤作用。TRAIL联合TR1-419作用于HeLa细胞，明显提高TRAIL杀伤肿瘤细胞的活性，同时激活Caspase8，启动凋亡信号转导通路。体内实验证明了TR1-419可增强TRAIL的抑制肿瘤生长作用。

结论

通过建立高效表达方法制备TR1-419抗体及TRAIL蛋白，并验证TR1-419可通过活化Caspase-8提高TRAIL在体内外抗肿瘤作用，为抗肿瘤免疫治疗提供新策略。