基于易错PCR技术的黏质沙雷氏菌脂肪酶基因LipA的定向进化

• 作 者: 陈英 朱绮霞 张搏 陈东 黄日波
• 机 构: 广西科学院非粮生物质酶解国家重点实验室国家非粮生物质能源工程技术研究中心广西生物炼制重点实验室
• 出 处: 生物技术通报
• 发表日期: 2011年4期
• 关键词: 黏质沙雷氏菌 脂肪酶 易错PCR 定向进化 Serratia marcescens Lipase Error-prone PCR Directed evolut
• 基金项目: 生产生物柴油共性关键技术的研发——生物柴油生产用共性脂肪酶的技术和工艺研究（桂科攻0895003-4-1）

利用易错PCR技术对黏质沙雷氏菌脂肪酶基因LipA进行定向进化,经过筛选最终获得一个比活力比野生酶提高了425 U/mg的突变体ep1,测序分析ep1有5个氨基酸发生了突变,与野生酶相比ep1的最适pH值由原来的8.5降低为7.5,Tm值提高3℃,Km值由原来的40 mg/mL降低为12.5 mg/mL。对其三维结构进行分析,推测酶学性质的改变可能与处在活性中心右前方双螺旋发卡结构上的I58A、和处在下部β卷曲折叠拐角处的S375G的突变有关。