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目的:建立以高效液相色谱法测定人血清中甲氨蝶呤浓度的方法。方法:色谱柱为WatersC18,流动相为乙腈-pH7.2的磷酸盐缓冲液(12:88),柱温为30℃,流速为1.0mL·min^-1,检测波长为303nm。结果:甲氨蝶呤血药浓度在0.5~80μ·gmL^-1范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9994);方法回收率均〉90%,日内、日间RSD分别为3.03%~3.52%、2.57%~4.05%。结论:本方法简便、快速、准确、灵敏,适用于甲氨蝶呤体内血药浓度测定和药动学研究。