采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源膀胱癌特异性抗体基因库

• 作 者: 蓝开健 张哲欢 梁中锟 王俊洁 娄海波 周元平 刘叔文 李长
• 机 构: 南方医科大学南方医院,南方医科大学汕头市中心医院,南方医科大学药学院,南方医科大学中医药学院,南方医科大学杭州环捷科技有限公司
• 出 处: 南方医科大学学报
• 发表日期: 2013年5期
• 关键词: 膀胱癌 哺乳动物细胞表面展示 全长人源抗体 流式细胞仪检测 bladder cancer mammalian cell display full-lengt
• 基金项目: 基金项目：广东省自然科学基金（S2011010003912,s2012040006972）,教育部高等学校博士学科点专项科研基金（20124433120002）,杭州环捷科技有限公司科研基金,广东省教育厅育苗工程项目（LYMll037）,南方医科大学科研启动计划

目的构建大容量且能高效展示于哺乳动物细胞表面的全长人源膀胱癌特异性抗体基因库。方法分离膀胱癌患者的外周血单核细胞（PBMc），提取PBMC的总,RNA，用RT-PCR方法扩增全套IgGl重链可变区（VH）和Kappa型轻链全长（LCK）基因，经过相应的限制性内切酶酶切后分别插,ApDGB－HC－TM载体，分别构建膀胱癌特异性的抗体重链基因库和轻链基因库（一级抗体库）。随机挑取20个单克隆测定抗体基因序列，并瞬时转染FCHO细胞，结合流式细胞仪检测细胞表面抗体的表达。将上述构建好的轻重链基因库通过4片段连接