【摘 要】
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目的 在预测miR-217对泛素特异性蛋白酶7(USP7)靶向作用的基础上探讨USP7在HepG2.2.15细胞中的促炎机制.方法 将HepG2.2.15细胞分为对照组、转染组(siRNA-USP7)和阴性对照组(siRNA-NC).检测细胞上清液中谷丙转氨酶(GPT)及谷草转氨酶(GOT)的含量;用酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞上清液中乙型病毒性肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型病毒性肝炎e抗原(HBeAg)的含量;用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)测定USP7、核因子κB p65(
【机 构】
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华北理工大学公共卫生学院,河北唐山063200;华北理工大学临床医学院,河北唐山063200;华北理工大学公共卫生学院,河北唐山063200;华北理工大学生命科学学院,河北唐山063200
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目的 在预测miR-217对泛素特异性蛋白酶7(USP7)靶向作用的基础上探讨USP7在HepG2.2.15细胞中的促炎机制.方法 将HepG2.2.15细胞分为对照组、转染组(siRNA-USP7)和阴性对照组(siRNA-NC).检测细胞上清液中谷丙转氨酶(GPT)及谷草转氨酶(GOT)的含量;用酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞上清液中乙型病毒性肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型病毒性肝炎e抗原(HBeAg)的含量;用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)测定USP7、核因子κB p65(NF-κB p65)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA含量;用蛋白质印迹(Western blot)法和ELISA法检测各指标蛋白含量;用免疫共沉淀法验证USP7与NF-κB p65的相互作用.结果 对照组、转染组和阴性对照组的GPT含量分别为(13.45 ±0.07),(6.85 ±0.21)和(13.75±0.35)U·L-1;GOT含量分别为(15.10 ±0.57),(7.55 ±0.07)和(15.70±0.42)U·L-1;HBsAg含量分别为(3766.00±62.39),(2093.50±51.47)和(3727.00±55.73) pg·mL-1;HBeAg含量分别为(49.64±0.65),(27.49 ±0.60)和(49.59±1.13)pg·mL-1;USP7蛋白表达量分别为0.97 ±0.03,0.49±0.01和0.96 ±0.04;NF-κB p65蛋白表达量分别为0.73±0.03,0.46±0.02和0.76±0.01;IL-6蛋白表达量分别为(83.00 ±4.24),(43.00±4.24)和(82.50±3.54)pg·mL-1;TNF-α蛋白表达量分别为(95.00±2.83),(57.00±1.41)和(92.50±4.95) pg·mL-1,转染组与对照组相比,差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).免疫共沉淀显示USP7与NF-κB p65能够有效形成复合物.结论 在乙型病毒性肝炎中,USP7呈现高表达,抑制USP7可减轻乙型病毒性肝炎细胞中NF-κB p65、IL-6以及TNF-α的表达,缓解肝细胞炎性损伤.
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