miRNA-499a-5p靶向CD38对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤的影响及其机制研究

• 作 者: 孙蓓 马萍萍 赵岚 徐辉 鲍金伟
• 机 构: 烟台市烟台山医院心血管内科 264000,烟台市烟台山医院心血管内科 264000,烟台市烟台山医院心血管内科 264000,烟台市烟台山医院心血管内科 264000,烟台市烟台山医院心血管内科 26
• 出 处: 中华微生物学和免疫学杂志
• 发表日期: 2020年40期
• 关键词: miRNA-499a-5p CD38基因 H2O2 心肌细胞损伤

目的

探讨miRNA-499a-5p靶向CD38对过氧化氢(H₂O₂)诱导的心肌细胞损伤的影响及作用机制。

方法

体外培养H9c2心肌细胞，采用H₂O₂诱导心肌细胞损伤模型。实验分为对照组、H₂O₂组、H₂O₂＋阴性对照(NC)组和H₂O₂＋miRNA-499a-5p组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)法分别检测心肌细胞中miRNA-499a-5p和CD38的表达，噻唑蓝(MTT)法检测心肌细胞存活率，试剂盒检测活性氧簇(ROS)水平和乳酸脱氢酶(LDH)活性，Annexin V-FITC/PI双染法检测心肌细胞凋亡率，Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化Akt(p-Akt)的表达量。双荧光素酶报告基因试验检测miRNA-499a-5p和CD38的靶向关系。

结果

H₂O₂组心肌细胞中miRNA-499a-5p、Bcl-2、p-PI3K、p-Akt的表达水平及心肌细胞存活率与对照组相比均明显降低(P<0.05)，而CD38和Bax的表达水平、ROS水平、LDH活性及细胞凋亡率均明显升高(P<0.05)。H₂O₂＋miRNA-499a-5p组心肌细胞中miRNA-499a-5p、Bcl-2、p-PI3K、p-Akt的表达水平及心肌细胞存活率与H₂O₂组相比均明显升高(P<0.05)，而CD38和Bax的表达水平、ROS水平、LDH活性及细胞凋亡率均明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因试验证实了CD38是miRNA-499a-5p的靶基因。

结论

miRNA-499a-5p能够通过抑制CD38的表达减轻H₂O₂诱导的心肌细胞损伤，该作用机制可能与PI3K/Akt信号通路有关。