【摘 要】
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目的建立同位素稀释超高效液相色谱串联质谱（ID-UPLC/MS/MS）方法测定血清25羟维生素D2［25(OH)D2］和25羟维生素D3［25(OH)D3］，以用于常规临床实验室评价维生素D含量。方法方法学建立及评价。2013年5月至8月征集的500名北京健康志愿者，采集血清用于建立参考区间。以稳定同位素标记的25(OH)D2-D3和25(OH)D3-D3作内标，首先用硫酸锌溶液和甲醇溶液沉淀血清
【机 构】
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目的建立同位素稀释超高效液相色谱串联质谱（ID-UPLC/MS/MS）方法测定血清25羟维生素D2［25(OH)D2］和25羟维生素D3［25(OH)D3］，以用于常规临床实验室评价维生素D含量。
方法方法学建立及评价。2013年5月至8月征集的500名北京健康志愿者，采集血清用于建立参考区间。以稳定同位素标记的25(OH)D2-D3和25(OH)D3-D3作内标，首先用硫酸锌溶液和甲醇溶液沉淀血清蛋白、正己烷震荡提取、离心后吸取上清液、氮气挥干，再用流动相重组，应用ID-UPLC/MS/MS技术分析；质谱采用正离子电喷雾离子化的多离子反应监测模式，25(OH)D2和25(OH)D3定量离子通道选择质荷比（m/z）分别为413.3→395.3和401.4→383.4；内标25(OH)D2-D3和25(OH)D3-D3离子通道m/z分别为416.3→398.3和404.4→386.4。以标准品制作标准曲线，结合稳定同位素内标法定量,建立ID-UPLC/MS/MS法快速测定25(OH)D2和25(OH)D3的方法。用含4个水平25(OH)D3的混合人血和3个水平25(OH)D2和25(OH)D3的质控品进行3次重复分析，每次每种样本重复分析3份，以考察方法的精密度，同时评价血清样本添加不同浓度标准品的加样回收率。初步建立北京人群血清25(OH)D参考范围，亚组间差异采用独立样本t检验。
结果用ID-UPLC/MS/MS法在本实验条件下可同时快速检测血清25(OH)D2和25(OH)D3，分析时间仅4.5min，特异性高，未见明显干扰因素。25(OH)D2［或25(OH)D3］/内标峰面积比与对应的浓度线性相关系数>0.999，25(OH)D2批内和总变异分别为1.89%~4.19%和2.58%~7.90%，25(OH)D3批内和总变异分别为1.51%~2.86%和1.89%~3.26%。25(OH)D2和25(OH)D3三次试验的加样回收率范围为98.12%~103.11%和98.00%~103.40%。 25(OH)D2和25(OH)D3检测限（LOD）均为0.39 ng/ml，定量限（LOQ）分别为1.25 ng/ml和1 ng /ml，具有较高的灵敏度。
结论本研究成功建立了ID-UPLC/MS/MS同时测定血清25(OH)D2和25(OH)D3的方法，该法可应用于常规临床实验室评价维生素D含量。（中华检验医学杂志，2014,37：617-622）
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