【摘 要】
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取临床确诊为早老性痴呆(Alzheimers discase,AD)患者的大脑组织,应用磁珠法直接提取mRNA,电泳检测其质量.经逆转录合成双链cDNA后,用碱性凝胶电泳检测其大小在0.2～9.0kb范围,
【机 构】
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北京大学生命科学学院生物化学与分子生物学系蛋白质工程国家重点实验室,北京,100871;
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取临床确诊为早老性痴呆(Alzheimers discase,AD)患者的大脑组织,应用磁珠法直接提取mRNA,电泳检测其质量.经逆转录合成双链cDNA后,用碱性凝胶电泳检测其大小在0.2～9.0kb范围,主要集中在1.0～2.0kb之间.层析除去多余的adaptors,收集大于400bp的cDNA片段,与载体pYESTrp2连接,经电转化后,得到克隆总数为5.1×105的AD病人大脑cDNA文库.用PCR技术从该文库中扩增得到小肠三叶因子(intestinal trefoil factor,ITF)[1]和神经生长抑制因子(growth inhibitory factor,GIF)[2]的cDNA编码区.研究表明,所构建的cDNA文库质量较高,可广泛用于AD病研究工作.同时,将所克隆的GIF编码区插入到载体pHybLex/Zeo上,构建成带饵基因的质粒,为进一步通过酵母双杂交方法搜寻与GIF相互作用的神经因子提供了必要条件.
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