人PDX-1基因真核表达载体的构建及表达

• 作 者: 陈寒蓓 董艳 苏青
• 机 构: 上海交通大学医学院新华医院内分泌科
• 出 处: 上海交通大学学报：医学版
• 发表日期: 2007年1期
• 关键词: 胰十二指肠同源盒 基因克隆 真核表达载体 转染 pancreatic duodenal homeobox 1 gene clone eukaryotic ex

目的构建人胰十二指肠同源盒（PDX-1）基因的真核表达载体，观察其在NIH3T3细胞中的表达。方法以人胰岛细胞瘤cDNA为模板，采用聚合酶链式反应（PCR）扩增PDX-1基因编码区的全部序列，克隆入真核细胞表达载体pcDNA3.1中，经限制性内切酶双酶切及DNA序列分析鉴定目的基因。序列正确的重组质粒用脂质体转染NIH3T3细胞，Western blot观察基因表达情况。结果PCR扩增的特异性片段长度为852 bp，以此构建的重组质粒pcDNA3.1-PDX-1，经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后显示5.5