【摘 要】
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目的:构建携带大鼠Slfn3基因的重组腺病毒表达载体,转染HEK293细胞产生病毒.方法:以pMSV-Slfn3-GFP为模板扩增Slfn3基因,再以质粒pAdeno-EF1a-MCS-MCMV-EGFP-3FLAG为载体,通
【机 构】
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贵州医科大学附院 心血管内科, 贵州 贵阳 550004贵州省人民医院 心血管内科, 贵州 贵阳 550002;贵州医科大学附院 超声科,贵州 贵阳,550004;贵州医科大学附院 心血管内科,贵州
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目的:构建携带大鼠Slfn3基因的重组腺病毒表达载体,转染HEK293细胞产生病毒.方法:以pMSV-Slfn3-GFP为模板扩增Slfn3基因,再以质粒pAdeno-EF1a-MCS-MCMV-EGFP-3FLAG为载体,通过酶切、连接及转化获得pAdeno-EF1a-Slfn3-MCMV-EGFP-3FLAG重组腺病毒载体,采用内切酶NheI酶切及测序鉴定重组腺病毒载体,将该重组载体在HEK293细胞进行包装和放大培养,镜下观察荧光、Western blot鉴定重组质粒标签Flag蛋白在HEK293细胞中的表达.结果:构建重组腺病毒质粒pAdeno-EF1a-Slfn3-MCMV-EGFP-3FLAG,并在HEK293细胞中成功包装和扩增,经鉴定获得重组腺病毒rAD-Slfn3.结论:成功构建重组腺病毒载体pAdeno-EF1-Slfn3-MCMV-EGFP-3FLAG,并在HEK293细胞成功获得重组腺病毒rAD-Slfn3.
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