【摘 要】
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目的:观察siRNA沉默核糖体蛋白L31(ribosomal protein L31,RPL31)基因表达对人胰腺癌PANC-1细胞的影响.方法:针对RPL31基因设计了3条siRNA,使用脂质体LipofectamineTM2000转
【机 构】
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华东理工大学生物工程学院,上海交通大学药学院,上海来益生物药物研究开发中心有限责任公司,
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目的:观察siRNA沉默核糖体蛋白L31(ribosomal protein L31,RPL31)基因表达对人胰腺癌PANC-1细胞的影响.方法:针对RPL31基因设计了3条siRNA,使用脂质体LipofectamineTM2000转染人胰腺癌PANC-1细胞,同时设立空白对照组和阴性对照组,转染成功后通过实时定量PCR及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测RNA干扰沉默RPL31基因的效果,四氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,Transwell小室检测细胞迁移,ELISA检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达.结果:转染48h后,3条siRNA能显著抑制RPL31基因mRNA和蛋白的表达;MTT结果显示,PANC-1细胞增殖明显受到抑制;细胞周期分布中G0/G1期明显增加、S期减少(G0/G1:59.85%±5.47%vs45.71%±3.44%;S:28.63%±4.52%vs45.13%±2.64%,均P<0.05);转染后细胞迁移数目(178.6个±30.3个)较空白对照组(470.5个±22.8个)与阴性对照组(474.2个±20.4个)明显减少,差异显著(P<0.05);转染后PANC-1细胞的VEGF表达量也明显减少[1563.45pg/(106cell24h)±24.95pg/(106cell24h)vs2804.6pg/(106cell24h)±40.46pg/(106cell24h),2791.5pg/(106cell24h)±44.77pg/(106cell24h)].结论:RPL31siRNA能明显抑制PANC-1细胞RPL31的表达,抑制细胞增殖,降低细胞迁移及VEGF表达,RPL31基因有可能成为胰腺癌基因治疗的新靶点.
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