探讨RNA干扰(RNAi)介导泛素-核糖体融合蛋白52(UBA52)基因沉默对高糖环境下鼠肾小管上皮细胞NRK-52E转分化信号通路转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad的影响。
方法首先根据培养基葡萄糖浓度将NRK-52E细胞分为4组：正常对照组(5.6 mmol/L葡萄糖)、高渗对照组(5.6 mmol/L葡萄糖+24.4 mmol/L甘露醇)、葡萄糖中浓度组(20 mmol/L葡萄糖)、葡萄糖高浓度组(30 mmol/L葡萄糖)并分别干预48 h，通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测并比较各组UBA52、Smad7、TGF-β1水平，观察葡萄糖浓度对上述指标的表达影响。然后采用三个不同基因序列的UBA52小干扰RNA(UBA52 siRNA)分别转染NRK-52E细胞，通过荧光定量PCR筛选出最佳转染效果的UBA52 siRNA基因序列，并确定最佳转染时间及转染剂量。然后将NRK-52E细胞分为3组：空白对照组(30 mmol/L葡萄糖)、阴性对照组(30 mmol/L葡萄糖+无关RNA转染组)及转染组(30 mmol/L葡萄糖+UBA52 siRNA转染)。48 h后实时荧光定量PCR法分别检测各组UBA52、TGF-β1、Smad7的mRNA表达变化，Western blotting法检测TGF-β1、Smad2/3、Smad7的蛋白表达。通过随机区组方差分析对上述指标进行统计学分析。
结果葡萄糖干预实验中正常对照组、高渗对照组、葡萄糖中浓度组、葡萄糖高浓度组肾小管上皮细胞UBA52、TGF-β1、Smad7 mRNA的表达量差异均有统计学意义(F=60.914、65.112、29.390，均P<0.05)；葡萄糖中浓度组及高浓度组的UBA52、TGF-β1表达均明显高于正常对照组及高渗对照组，而Smad7的表达则明显低于正常对照组及高渗对照组。转染实验中空白对照组、阴性对照组及转染组TGF-β1 mRNA表达量分别为1.00±0.04、0.98±0.04、0.49±0.14，差异有统计学意义(F=26.364，P<0.001)，转染组明显低于其他2组；3组Smad7 mRNA表达量分别为1.00±0.12、1.05±0.17、2.24±0.31，差异有统计学意义(F=22.816，P<0.001)，转染组明显高于其他2组。3组TGF-β1蛋白表达量分别为0.676±0.357、0.613±0.011、0.184±0.073，差异有统计学意义(F=96.433，P<0.01)，转染组表达量最低；Smad2/3的蛋白表达量分别为0.68±0.10、0.63±0.05、0.27±0.15，差异有统计学意义(F=12.194，P<0.05)，转染组明显低于其他2组；Smad7的蛋白表达量分别为0.52±0.05、0.55±0.12、0.83±0.06，3组差异有统计学意义(F=12.154，P<0.05)，转染组表达量最高。
结论干预高糖环境下鼠肾小管上皮细胞转分化信号通路TGF-β/Smad可能成为糖尿病肾病肾间质纤维化新的干预靶点。