【摘 要】
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目的 分析斯氏按蚊肽聚糖识别蛋白PGRP-LB的序列,表达和纯化PGRP-LB蛋白. 方法 采用生物信息学方法分析PGRP-LB蛋白的序列.以斯氏按蚊的cDNA为模板PCR扩增PGRP-LB,采用无缝克
【机 构】
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上海理工大学医疗器械与食品学院,上海200093;复旦大学生命科学学院
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目的 分析斯氏按蚊肽聚糖识别蛋白PGRP-LB的序列,表达和纯化PGRP-LB蛋白. 方法 采用生物信息学方法分析PGRP-LB蛋白的序列.以斯氏按蚊的cDNA为模板PCR扩增PGRP-LB,采用无缝克隆的方法将其克隆到原核表达载体pET28a中,然后转化入大肠埃希菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,利用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行目的蛋白的诱导表达.SDS-PAGE凝胶电泳及考马斯亮蓝染色检测PGRP-LB的表达情况.经镍离子亲和层析纯化后,Bradford法检测洗脱液的浓度.通过MEGA7软件构建系统进化树,进行PGRP-LB的进化分析. 结果 成功获得pET28a-PGRP-LB的重组质粒,37℃、0.5 mmol/L的IPTG能诱导出大量的包涵体PGRP-LB重组蛋白,相对分子质量约为26×103,纯化后的蛋白浓度为0.5 mg/ml.进化分析显示,斯氏按蚊PGRP-LB与同科物种间亲缘关系较近. 结论 成功使用大肠埃希菌原核表达系统表达斯氏按蚊PGRP-LB蛋白,为该蛋白在按蚊体内的定位及功能研究奠定了基础.
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