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摘 要 目的:探讨P-糖蛋白(Pgp)P53蛋白在结肠腺癌组织中的表达与意义。方法:应用免疫组织化学方法检测术前未进行化疗的69例结肠癌组织中P-gp和P53蛋白的表达。结论:结肠腺癌中多药耐药基因产物P-糖蛋白和P53蛋白表达的阳性率同肿瘤的恶性程度呈正相关,并可作为结肠腺癌临床耐药和预后判断的一个可靠指标。
关键词 结肠腺癌 P-糖蛋白 P53蛋白 阳性率
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.01.125
资料与方法
2003～2005年收集术后诊断为结肠腺癌手术切除的标本,并为病理科常规免疫组织化学染色的存档资料69例,男39例,女30例,男:女=1.3:1。所有病例术前均未化疗。标本用10%甲醛固定,石蜡包埋,连续切片4μm厚。
方法:采用S-P免疫组化染色方法,鼠抗人P53和P-gp为即用型抗体。染色步骤按产品说明书进行,染色前进行微波抗原修复,DAB显色。磷酸盐缓冲液代替第一抗体作阴性对照。
阳性判断:胞膜和胞浆染成棕黄色为P-gp阳性,胞核染成棕黄色为P53阳性。无阳性细胞或阳性细胞<5%为阴性,并根据阳性细胞的数量和染色强度,将阳性结果分为阳性(+)和强阳性(++)。为方便统计学分析将阳性(+)和强阳性(++)均列为阳性。
统计学处理:采用X2检验。
结 果
P-gp阳性表达:P-gp阳性染色部位主要为胞膜和胞浆。P-gp表达率为37.68%,P-gp表达与结肠腺癌的组织学分级,浸润深度和淋巴结转移差异均无显著性(P<0.05)。
P53阳性表达:P53阳性染色部位主要为胞核。表达率42.02%,P53表达与结肠腺癌的组织学分级和浸润深度差异均无显著性(P>0.05),与淋巴结转移差异有显著性(P<0.001)。见表1。
P53与P-gp表达的关系:29例P53阳性的结肠癌中P-gp阳性16例,占55.17%,高于P53阴性组6/34(17.64%),二者之间差异有显著性(P<0.001)。见表2。
讨 论
结肠腺癌化疗失败的主要原因之一为肿瘤细胞对化疗药物产生的多药耐药性(MDR)。MDR即对一种化疗药物耐药的肿瘤,同时对另外一些与之化学结构、作用机制完全不同的化疗药物的交叉耐药。
MDR是指抗某种细胞毒物的耐药细胞系对许多结构上无关的和作用机制不同的其它抗癌药物产生交叉抗药性。被认为是多种肿瘤化疗失败的主要原因。在MDR细胞膜上有一种分子量为170的膜糖蛋白,并称之为P-糖蛋白(P-gp),也称为P170。P-pg是mdr l基因编码的一种能量依赖性转运蛋白。研究表明,P-gp在肾、肾上腺和胎盘等正常组织中高表达,在脑、肺、肝、脾及结肠等中度表达,并主要定位于一些具有分泌排泄功能的细胞,故认为在正常组织,P-gp起着对毒性化合物的清除作用。该蛋白的表达水平与细胞膜的通透性、细胞内药物浓度以及细胞耐药程度有关。
P53基因是重要的肿瘤抑制基因,许多人类肿瘤都伴有不同程度的P53基因突变,包括乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌和卵巢癌等。P53基因有野生型和突变型之分,前者因半衰期短,含量低,免疫组化方法很难测到;后者因其构象改变,半衰期延长,稳定性增加,因此目前用免疫组化所检测的多为突变型P53。野生型P53具有抑制癌细胞的增殖和促进癌细胞凋亡的作用,而突变型P53则相反,具有抑制癌细胞凋亡和促进癌细胞增殖的作用。本组结肠腺癌P53阳性率为42.02%与文献报道相符。我们的实验结果表明,结肠腺癌的P53阳性表达与肿瘤细胞分化程度和浸润深度无关(P>0.05),与淋巴转移状况有关(P<0.001),说明P53过度表达对癌细胞增殖抑制作用减弱,并能促进癌细胞转移,对判断包括结肠腺癌在内的各种癌症患者的预后有积极的临床意义。
研究表明,P53和P-gp之间有协同表达作用,基因转录水平研究发现,野生型P53具有抑制MDR基因转录作用,减低P-gp的生成,而突变型P53能增加MDR基因的表达[1]并通过抗细胞凋亡机制使肿瘤细胞产生耐药。我们的结果显示,结肠腺癌P53表达与P-gp表达呈显著正相关,与乳腺癌一样常表现为P53和P-gp的协同表达,说明二者之间存在有一定的内在关系,突变型P53能诱导MDR表达,为预后差的一个重要判断指标[2,3]。
参考文献
1 Nguyen KT,Liu B,Ueda K,et al.Transactivation of the human multidrug resistance(MDR1) gene promoter by p53 mutants.Oncol Res,1994,6:71-77.
2 Linn SC,Honkoop AH,Hoekman K,et al.P53 and P-glycoprotein are often co-expression and are associated with poor prognosis in breast cancer.Br J Cancer,1996,74:63-68.
3 Honkoop AH,van-Diest PJ,de-Jong JS,et al.Prognostic role of clinical,pathological and biological characteristics in patients with locally advanced breast cancer.Br J Cancer,1998,77:621-626.
关键词 结肠腺癌 P-糖蛋白 P53蛋白 阳性率
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.01.125
资料与方法
2003～2005年收集术后诊断为结肠腺癌手术切除的标本,并为病理科常规免疫组织化学染色的存档资料69例,男39例,女30例,男:女=1.3:1。所有病例术前均未化疗。标本用10%甲醛固定,石蜡包埋,连续切片4μm厚。
方法:采用S-P免疫组化染色方法,鼠抗人P53和P-gp为即用型抗体。染色步骤按产品说明书进行,染色前进行微波抗原修复,DAB显色。磷酸盐缓冲液代替第一抗体作阴性对照。
阳性判断:胞膜和胞浆染成棕黄色为P-gp阳性,胞核染成棕黄色为P53阳性。无阳性细胞或阳性细胞<5%为阴性,并根据阳性细胞的数量和染色强度,将阳性结果分为阳性(+)和强阳性(++)。为方便统计学分析将阳性(+)和强阳性(++)均列为阳性。
统计学处理:采用X2检验。
结 果
P-gp阳性表达:P-gp阳性染色部位主要为胞膜和胞浆。P-gp表达率为37.68%,P-gp表达与结肠腺癌的组织学分级,浸润深度和淋巴结转移差异均无显著性(P<0.05)。
P53阳性表达:P53阳性染色部位主要为胞核。表达率42.02%,P53表达与结肠腺癌的组织学分级和浸润深度差异均无显著性(P>0.05),与淋巴结转移差异有显著性(P<0.001)。见表1。
P53与P-gp表达的关系:29例P53阳性的结肠癌中P-gp阳性16例,占55.17%,高于P53阴性组6/34(17.64%),二者之间差异有显著性(P<0.001)。见表2。
讨 论
结肠腺癌化疗失败的主要原因之一为肿瘤细胞对化疗药物产生的多药耐药性(MDR)。MDR即对一种化疗药物耐药的肿瘤,同时对另外一些与之化学结构、作用机制完全不同的化疗药物的交叉耐药。
MDR是指抗某种细胞毒物的耐药细胞系对许多结构上无关的和作用机制不同的其它抗癌药物产生交叉抗药性。被认为是多种肿瘤化疗失败的主要原因。在MDR细胞膜上有一种分子量为170的膜糖蛋白,并称之为P-糖蛋白(P-gp),也称为P170。P-pg是mdr l基因编码的一种能量依赖性转运蛋白。研究表明,P-gp在肾、肾上腺和胎盘等正常组织中高表达,在脑、肺、肝、脾及结肠等中度表达,并主要定位于一些具有分泌排泄功能的细胞,故认为在正常组织,P-gp起着对毒性化合物的清除作用。该蛋白的表达水平与细胞膜的通透性、细胞内药物浓度以及细胞耐药程度有关。
P53基因是重要的肿瘤抑制基因,许多人类肿瘤都伴有不同程度的P53基因突变,包括乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌和卵巢癌等。P53基因有野生型和突变型之分,前者因半衰期短,含量低,免疫组化方法很难测到;后者因其构象改变,半衰期延长,稳定性增加,因此目前用免疫组化所检测的多为突变型P53。野生型P53具有抑制癌细胞的增殖和促进癌细胞凋亡的作用,而突变型P53则相反,具有抑制癌细胞凋亡和促进癌细胞增殖的作用。本组结肠腺癌P53阳性率为42.02%与文献报道相符。我们的实验结果表明,结肠腺癌的P53阳性表达与肿瘤细胞分化程度和浸润深度无关(P>0.05),与淋巴转移状况有关(P<0.001),说明P53过度表达对癌细胞增殖抑制作用减弱,并能促进癌细胞转移,对判断包括结肠腺癌在内的各种癌症患者的预后有积极的临床意义。
研究表明,P53和P-gp之间有协同表达作用,基因转录水平研究发现,野生型P53具有抑制MDR基因转录作用,减低P-gp的生成,而突变型P53能增加MDR基因的表达[1]并通过抗细胞凋亡机制使肿瘤细胞产生耐药。我们的结果显示,结肠腺癌P53表达与P-gp表达呈显著正相关,与乳腺癌一样常表现为P53和P-gp的协同表达,说明二者之间存在有一定的内在关系,突变型P53能诱导MDR表达,为预后差的一个重要判断指标[2,3]。
参考文献
1 Nguyen KT,Liu B,Ueda K,et al.Transactivation of the human multidrug resistance(MDR1) gene promoter by p53 mutants.Oncol Res,1994,6:71-77.
2 Linn SC,Honkoop AH,Hoekman K,et al.P53 and P-glycoprotein are often co-expression and are associated with poor prognosis in breast cancer.Br J Cancer,1996,74:63-68.
3 Honkoop AH,van-Diest PJ,de-Jong JS,et al.Prognostic role of clinical,pathological and biological characteristics in patients with locally advanced breast cancer.Br J Cancer,1998,77:621-626.