探讨Yes相关蛋白1(Yap1)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠肺纤维化中的作用及其机制。
方法体内实验将18只Wistar大鼠按随机数字表法分成对照组、博来霉素(BLM)组、BLM＋AngⅡ组各6只；造模后28 d后取肺组织行HE、Masson染色及Yap1免疫组化评价。体外分离培养原代肺成纤维细胞，予10－7 mmol/L AngⅡ或AngⅡ拮抗剂伊贝沙坦作用后，PCR及Western印迹法检测不同时间段Yap1、PDZ结合相关性转录共激活因子(TAZ)、Ⅰ型胶原的mRNA、蛋白相对表达量及Yap1、TAZ核质转位情况。随后设置空载质粒(vector)、vector＋AngⅡ、Yap1 RNA干扰(shRNA)、Yap1 shRNA＋AngⅡ四个组，Western印迹法检测Yap1、TAZ、Smad3、Ⅰ型胶原等蛋白相对表达量，CCK-8及EdU实验检测细胞增殖力。
结果BLM组肺纤维化明显，Yap1免疫组化表达增加，BLM＋AngⅡ组肺纤维化程度和Yap1表达均高于BLM组(均P<0.05)。体外实验中，AngⅡ不同刺激时间组Yap1、TAZ及Ⅰ型胶原的mRNA及蛋白相对表达量均显著高于0 h(均P<0.05)；其中，磷酸化Yap1蛋白相对表达量在2 h时达峰值。核质转位方面，24 h时AngⅡ组胞核中Yap1、TAZ相对表达量显著高于空白组(0.382±0.007比0.031±0.001，1.097±0.030比0.357±0.015)，胞质中相对表达量显著低于空白组(0.323±0.058比0.418±0.044，0.858±0.059比1.201±0.015)，AngⅡ＋伊贝沙坦组胞核中Yap1、TAZ相对表达量显著低于AngⅡ组(0.323±0.058比0.418±0.044，0.858±0.059比1.201±0.015)，胞质中相对表达量显著高于AngⅡ组(0.598±0.060比0.323±0.058，1.495±0.052比0.858±0.059)(均P<0.05)。Yap1 shRNA＋AngⅡ组Yap1、TAZ、Smad3及Ⅰ型胶原蛋白相对表达量均显著低于vector＋AngⅡ组(均P<0.05)。vector＋AngⅡ组吸光度、EdU阳性细胞百分比均显著高于vector组，Yap1 shRNA＋AngⅡ组吸光度、EdU阳性细胞百分比均显著低于vector＋AngⅡ组(均P<0.05)。
结论AngⅡ通过活化Yap1促进原代肺成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原合成，进而诱导大鼠肺纤维化。