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目的
探讨多聚赖氨酸表面修饰的脱钙骨基质(PLL-DBM)富集材料的细胞相容性。
方法将PLL-DBM材料及其浸提液分别与人骨髓基质干细胞(BMSCs)体外共培养,于培养20 h、3 d、7 d行细胞形态学观察, 四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定培养1、3、5、7 d的细胞增殖活性,流式细胞仪检测人BMSCs的表型和细胞周期。浸提液作用3、5、7 d检测成骨诱导后BMSCs的碱性磷酸酶(ALP)活性,14 d行钙结节四环素荧光染色、茜素红染色、Ⅰ型胶原免疫组织化学染色。应用分光光度法进行溶血试验。
结果与PLL-DBM及其浸提液共培养的人BMSCs表现出更好的黏附与增殖特性,培养5 d后浸提液组细胞增殖率高于阴性对照组(P< 0.05);且细胞增殖率随浸提液浓度增加而增高,细胞毒性为0~1级。浸提液组与对照组人BMSCs均未见有DNA倍体异常细胞,且浸提液组增殖期(S+G2-M)细胞比例显著升高,差异有统计学意义(P< 0.05)。100%浸提液组与对照组之间成骨诱导后BMSCs的细胞形态与成骨活性比较差异均无统计学意义(P>0.05)。实验组溶血指数为2.6%,达到标准要求。
结论PLL-DBM富集材料可促进人BMSCs的黏附、增殖与基质分泌等,且不影响人BMSCs的表型和成骨诱导后BMSCs的成骨活性,具有良好的细胞相容性,是一种可供临床选择的骨髓干细胞富集材料。