【摘 要】
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目的 探讨丙戊酸钠(VPA)诱导神经干细胞(NSCs)向神经元分化过程中亨廷顿相关蛋白1(HAP-1)的表达及其作用.方法 分离培养SD大鼠海马NSCs,应用Real-time PCR和Western blotting
【机 构】
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南通大学医学院人体解剖学系,江苏省神经再生重点实验室,神经再生协同创新中心,江苏南通226001
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目的 探讨丙戊酸钠(VPA)诱导神经干细胞(NSCs)向神经元分化过程中亨廷顿相关蛋白1(HAP-1)的表达及其作用.方法 分离培养SD大鼠海马NSCs,应用Real-time PCR和Western blotting检测VPA诱导NSCs向神经元分化过程中0、1、3和5d时HAP-lmRNA和蛋白的表达变化;Real-time PCR检测成年SD大鼠多组织及NSCs、神经元和星形胶质细胞中HAP-1 mRNA的表达;应用小干扰RNA技术下调NSCs中HAP-1的表达后,Real-time PCR和Western blotting分别检测神经元特异分子微管解聚蛋白2(Stmn-2)、神经元分化因子l(Neurod-1)、微管相关蛋白2(Map-2)和突触蛋白1(Syn-1)基因和神经元特异性标志物β-微管蛋白Ⅲ(Tuj-1)的表达水平,应用免疫荧光检测NSCs向Tuj-1阳性神经元分化的比例,并观察神经元发育情况.结果 与对照组相比,VPA组NSCs向神经元分化过程中HAP-1 mRNA和蛋白在VPA处理后1d和3d表达明显上调;HAP-1mRNA在中枢神经系统的海马中呈优势表达,在神经元中表达较高,NSCs中表达较低,星形胶质细胞中表达最低;干扰HAP-1表达后,VPA诱导NSCs向神经元分化的比例减少,神经元发育变差.结论 VPA可能通过上调HAP-1的表达促进NSCs向神经元分化.
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