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摘要 研究微型月季的组织培养技术，发现采用MS 6-BA 0.5 mg/L NAA0.1 mg/L可以进行有效的芽诱导，MS 6-BA 0.3 mg/L NAA0.1 mg/L可以有效诱导微型月季组培苗的增殖，增殖系数最高可达到6～8，培养基MS IBA 0.5 mg/L NAA 0.2 mg/L可以有效诱导组培苗生根，生根率达到80%。同时分析了微型月季组织培养过程中的问题，包括外植体污染、组培中的褐变、玻璃化、增殖过程中试管开花等。
关键词 微型月季；组织培养；褐变
中图分类号 S685.12 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）06-0187-01
微型月季是蔷薇科蔷薇属多年生木本植物，是现代月季中的一个特殊种类，其株型矮小，呈球状，花头众多，被称为“钻石月季”。主要应用在盆栽观赏、点缀草坪和吊挂装饰、阳台布置等方面[1]。因其花色奇异、花多、植株矮小且全年开放等特点很受市场和消费者的喜爱。但是由于微型月季植株矮小，茎细，难以扦插繁殖，繁殖系数低，影响其规模化生产[2]，因此研究其组织培养快速繁殖具有重要的意义。
1 外殖体的接种
选取没有病虫害的健康成年盆栽植株，将其放入大棚，定期用杀菌剂进行喷洒，经过1个月后，采取粗壮的茎段作为外殖体，首先用洗洁精水浸泡20 min，用吸水纸将水分吸干，移至超净工作台，然后用70%酒精浸泡30 s，0.1%升汞浸泡6 min进行消毒，最后用无菌水清洗2～3遍。
2 芽的诱导
将消毒好的外植体切成带有1～2个节位的茎段，接入MS 6-BA 0.5 mg/L NAA 0.1 mg/L培养基，所有培养基中均添加蔗糖30 g/L、琼脂5 g/L，pH值5.6，培养温度（25±2）℃。经过2周的培养，即可诱导腋芽的萌发，生长正常，芽的诱导率可达到100%，如果加入6-BA的浓度过高（超过2 mg/L），会导致芽的畸形生长且后期脱落。
3 芽的增殖
将诱导出的小芽切下，接入增殖培养基：MS 6-BA 0.3 mg/L NAA 0.1 mg/L。培养2周，芽开始萌动，基部长出芽点，3周后就可以形成丛芽，增殖系数达到3～5，经过第2代增殖培养，增殖系数可达到6～8。增值培养25 d左右，芽高可达到2 cm左右，颜色嫩绿，植株生长正常，长势良好。
4 生根与移栽
将达到2 cm左右生长正常的苗切下，接入生根培养基：MS IBA 0.5 mg/L NAA 0.2 mg/L，可以有效诱导组培苗生根，生根率可达80%左右。经过25 d左右的生根培养，将组培苗移入塑料大棚炼苗，1周后移栽至穴盘。移栽基质为泥炭∶珍珠岩∶蛭石=3∶1∶1，同时再用一层透明塑料薄膜覆盖，以保持湿度，每周喷洒杀菌剂1～2次。移栽1个月后成活，长出新叶，移栽成活后揭开薄膜，移栽成活率可达85%左右。
5 讨论
（1）在微型月季的外殖体诱导中，细菌和真菌污染较严重，分析原因可能有2个方面：一是外植体较细，杀菌时间较短；二是因外植体上叶片切除时，留有一部分叶柄，在叶柄和茎相连的地方较难消毒干净。采用将母株移至温室大棚中，定期喷洒杀菌剂，经过一段时间再取外植体的方法，可以显著降低污染率。
（2）在微型月季继代过程中，会有部分增殖芽茎基切口处出现褐化现象，随着继代次数的增加，褐变逐渐严重。有研究表明，在培养基中添加一定量的活性碳、VC、PVP可以有效防止植物组织培养过程中的褐变[3-6]，该研究发现，添加1 g/L活性碳，可以减轻微型月季继代过程中褐变的发生。
（3）在大量试验中，笔者发现微型月季的增殖过程中易出现玻璃化苗，一是随着6-BA的浓度升高逐渐出现玻璃化现象，二是随着继代代数的升高，也会产生玻璃化现象，可以采取随着继代代数的升高适当降低6-BA的浓度，来降低玻璃化苗的比例。
（4）因微型月季的组培苗比较幼嫩，移栽要注意保水保湿，采用泥炭、珍珠岩和蛭石混合作为基质，保水性和透气性较好，移栽后覆盖透明的塑料薄膜小拱棚，可有效保湿，提高移栽成活率。
（5）有研究表明，微型月季继代增值系数呈先上升后下降的趋势，在第3代达到6.6，随着继代次数的增加，变异苗出现增多[7]。该研究中，当继代次数增加时，逐渐出现试管开花的现象，但此时瓶内开的花表现出畸形，花朵较小，花瓣为单层花瓣，颜色从粉红到白色到绿色，随着代数的继续增加，开花的现象逐渐严重，增殖系数降低。这可能与微型月季本身的激素分泌有关，有待进一步研究。
6 参考文献
[1] 陈昌岑，朱建镛.不同季节中IBA对迷你玫瑰不同节位之单节插穗发育的影响[J].中国园艺，1996，42（3）：204-216.
[2] 朱建华，汤晓.月季[M].北京：金盾出版社，1992.
[3] 陈惠娟.植物组织培养中褐变的产生机理及克服措施[J].植物保护，2005，31（ 2）：79- 82.
[4] 黄霞，黄学林，高东徽.防止香蕉茎尖培养中外植体褐变的研究[J].广西植物，1999，19（1）：78- 80.
[5] 郑孝丹，胡燕梅.海南龙血树组织培养及抗褐变的研究[J].武汉生物工程学院学报，2011（4）：235-237.
[6] 姚洪军，罗晓芳，田砚亭.植物组织培养外植体褐变的研究进展[J].北京林业大学学报，1999，21（3）：78-84.
[7] 宗树斌.微型月季的组培快繁技术[J].安徽农学通报，2010，16（13）：74-75.
关键词 微型月季；组织培养；褐变
中图分类号 S685.12 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）06-0187-01
微型月季是蔷薇科蔷薇属多年生木本植物，是现代月季中的一个特殊种类，其株型矮小，呈球状，花头众多，被称为“钻石月季”。主要应用在盆栽观赏、点缀草坪和吊挂装饰、阳台布置等方面[1]。因其花色奇异、花多、植株矮小且全年开放等特点很受市场和消费者的喜爱。但是由于微型月季植株矮小，茎细，难以扦插繁殖，繁殖系数低，影响其规模化生产[2]，因此研究其组织培养快速繁殖具有重要的意义。
1 外殖体的接种
选取没有病虫害的健康成年盆栽植株，将其放入大棚，定期用杀菌剂进行喷洒，经过1个月后，采取粗壮的茎段作为外殖体，首先用洗洁精水浸泡20 min，用吸水纸将水分吸干，移至超净工作台，然后用70%酒精浸泡30 s，0.1%升汞浸泡6 min进行消毒，最后用无菌水清洗2～3遍。
2 芽的诱导
将消毒好的外植体切成带有1～2个节位的茎段，接入MS 6-BA 0.5 mg/L NAA 0.1 mg/L培养基，所有培养基中均添加蔗糖30 g/L、琼脂5 g/L，pH值5.6，培养温度（25±2）℃。经过2周的培养，即可诱导腋芽的萌发，生长正常，芽的诱导率可达到100%，如果加入6-BA的浓度过高（超过2 mg/L），会导致芽的畸形生长且后期脱落。
3 芽的增殖
将诱导出的小芽切下，接入增殖培养基：MS 6-BA 0.3 mg/L NAA 0.1 mg/L。培养2周，芽开始萌动，基部长出芽点，3周后就可以形成丛芽，增殖系数达到3～5，经过第2代增殖培养，增殖系数可达到6～8。增值培养25 d左右，芽高可达到2 cm左右，颜色嫩绿，植株生长正常，长势良好。
4 生根与移栽
将达到2 cm左右生长正常的苗切下，接入生根培养基：MS IBA 0.5 mg/L NAA 0.2 mg/L，可以有效诱导组培苗生根，生根率可达80%左右。经过25 d左右的生根培养，将组培苗移入塑料大棚炼苗，1周后移栽至穴盘。移栽基质为泥炭∶珍珠岩∶蛭石=3∶1∶1，同时再用一层透明塑料薄膜覆盖，以保持湿度，每周喷洒杀菌剂1～2次。移栽1个月后成活，长出新叶，移栽成活后揭开薄膜，移栽成活率可达85%左右。
5 讨论
（1）在微型月季的外殖体诱导中，细菌和真菌污染较严重，分析原因可能有2个方面：一是外植体较细，杀菌时间较短；二是因外植体上叶片切除时，留有一部分叶柄，在叶柄和茎相连的地方较难消毒干净。采用将母株移至温室大棚中，定期喷洒杀菌剂，经过一段时间再取外植体的方法，可以显著降低污染率。
（2）在微型月季继代过程中，会有部分增殖芽茎基切口处出现褐化现象，随着继代次数的增加，褐变逐渐严重。有研究表明，在培养基中添加一定量的活性碳、VC、PVP可以有效防止植物组织培养过程中的褐变[3-6]，该研究发现，添加1 g/L活性碳，可以减轻微型月季继代过程中褐变的发生。
（3）在大量试验中，笔者发现微型月季的增殖过程中易出现玻璃化苗，一是随着6-BA的浓度升高逐渐出现玻璃化现象，二是随着继代代数的升高，也会产生玻璃化现象，可以采取随着继代代数的升高适当降低6-BA的浓度，来降低玻璃化苗的比例。
（4）因微型月季的组培苗比较幼嫩，移栽要注意保水保湿，采用泥炭、珍珠岩和蛭石混合作为基质，保水性和透气性较好，移栽后覆盖透明的塑料薄膜小拱棚，可有效保湿，提高移栽成活率。
（5）有研究表明，微型月季继代增值系数呈先上升后下降的趋势，在第3代达到6.6，随着继代次数的增加，变异苗出现增多[7]。该研究中，当继代次数增加时，逐渐出现试管开花的现象，但此时瓶内开的花表现出畸形，花朵较小，花瓣为单层花瓣，颜色从粉红到白色到绿色，随着代数的继续增加，开花的现象逐渐严重，增殖系数降低。这可能与微型月季本身的激素分泌有关，有待进一步研究。
6 参考文献
[1] 陈昌岑，朱建镛.不同季节中IBA对迷你玫瑰不同节位之单节插穗发育的影响[J].中国园艺，1996，42（3）：204-216.
[2] 朱建华，汤晓.月季[M].北京：金盾出版社，1992.
[3] 陈惠娟.植物组织培养中褐变的产生机理及克服措施[J].植物保护，2005，31（ 2）：79- 82.
[4] 黄霞，黄学林，高东徽.防止香蕉茎尖培养中外植体褐变的研究[J].广西植物，1999，19（1）：78- 80.
[5] 郑孝丹，胡燕梅.海南龙血树组织培养及抗褐变的研究[J].武汉生物工程学院学报，2011（4）：235-237.
[6] 姚洪军，罗晓芳，田砚亭.植物组织培养外植体褐变的研究进展[J].北京林业大学学报，1999，21（3）：78-84.
[7] 宗树斌.微型月季的组培快繁技术[J].安徽农学通报，2010，16（13）：74-75.