【摘 要】
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[目的]探究猪流行性腹泻病毒纳米抗体SH-Fc蛋白在毕赤酵母中的分泌表达情况,以期获得毕赤酵母表达系统,从而进一步研究PEDV的治疗方法.[方法]利用相关生物学分析软件对目的蛋
【机 构】
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石河子大学生命科学学院,新疆石河子832003;省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院,新疆石河子832000
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[目的]探究猪流行性腹泻病毒纳米抗体SH-Fc蛋白在毕赤酵母中的分泌表达情况,以期获得毕赤酵母表达系统,从而进一步研究PEDV的治疗方法.[方法]利用相关生物学分析软件对目的蛋白进行理化性质,磷酸化位点及二、三级结构的分析.将pUC57-SH-Fc质粒与酵母表达载体pPIC9K双酶切,构建真核表达载体pPIC9K-SH-Fc,经Sal Ⅰ酶线性化后电转入毕赤酵母GS115中,利用G418抗性筛选以及菌落PCR的方法鉴定阳性菌株,阳性菌株经过30℃、0.8％甲醇诱导72 h,用SDS-PAGE和Western Blotting鉴定诱导表达后的上清液中蛋白表达情况.[结果]成功构建了真核分泌表达载体pPIC9K-SH-Fc,成功在毕赤酵母中表达目的蛋白,表达产物分子量与理论值55.1 kDa相符合.[结论]成功诱导SH-Fc蛋白的分泌表达,获得了分泌表达目的蛋白的毕赤酵母表达系统,为后续研究PEDV的防治提供参考和奠定基础.
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