【摘 要】
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目的 探讨内质网应激(ERS)相关凋亡途径在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化发生、发展中的作用.方法 健康雄性Wistar大鼠25只,按随机数字表法分为UUO模型组(n=18)和假手
【机 构】
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天津医科大学总医院肾内科,天津医科大学肿瘤医院检验科,哈尔滨医科大学第二临床医学院肾内科
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目的 探讨内质网应激(ERS)相关凋亡途径在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化发生、发展中的作用.方法 健康雄性Wistar大鼠25只,按随机数字表法分为UUO模型组(n=18)和假手术组(n=7),UUO模型组行左侧输尿管结扎术,假手术组仅分离输尿管不结扎,分别于术后3 d、7 d、14 d处死各组大鼠,行HE和Masson染色,观察肾脏病理变化;比色法测定肾组织羟脯氨酸(HYP)含量;免疫组化法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA);原位末端标记法(TUNEL)与DNA电泳观察肾小管间质细胞凋亡情况;RT-PCR法检测梗阻侧肾组织ERS相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA表达变化;Western印迹法分析凋亡相关蛋白半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)和GRP78的蛋白表达变化.结果 与假手术组比较,UUO模型组肾脏病理改变加重,肾间质纤维化程度随梗阻时间延长逐渐加重,肾组织HYP含量显著升高(P＜0.05).肾组织α-SMA也在肾小管间质细胞广泛表达,TUNEL染色及DNA琼脂糖凝胶电泳提示大量的肾小管间质细胞凋亡.UUO模型组GRP78 mRNA表达于术后3 d即发生显著上调,而蛋白表达在术后7 d开始出现显著变化,与假手术组差异均有统计学意义(均P＜0.01);在此后观察期间内GRF78 mRNA和蛋白均持续高水平表达.模型组大鼠肾组织caspase-3的蛋白表达在UUO术后3 d即有显著上调(P＜0.05),且随着梗阻时间延长进行性升高,于术后7 d、14 d增多更为显著,与假手术组差异均有统计学意义(P＜0.05).相关分析显示GRP78蛋白表达与肾组织HYP含量和caspase-3蛋白表达均呈正相关(r=0.657,P＜0.01;r=0.714,P＜0.01).结论 UUO早期即可诱导ERS标志蛋白表达变化,触发ERS.长期ERS可诱导肾小管间质细胞凋亡;caspase-3介导的ERS相关凋亡途径可能参与了肾间质纤维化过程.
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