【摘 要】
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利用基因重组、PCR扩增、定点突变及转译优化等程序,构建了人红细胞生成素重组表达载体pCSV-EPO,并利用DEAE-dextran法转染猴细胞系COS7获得了EPO的暂时性高表达,EPO-ELISA定
【机 构】
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第二军医大学医学生物技术和分子遗传研究所,第二军医大学医学生物技术和分子遗传研究所,第二军医大学医学生物技术和分子遗传研究所,第二军医大学医学生物技术和分子遗传研究所,第二军医大学医学生物技术和分子遗
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利用基因重组、PCR扩增、定点突变及转译优化等程序,构建了人红细胞生成素重组表达载体pCSV-EPO,并利用DEAE-dextran法转染猴细胞系COS7获得了EPO的暂时性高表达,EPO-ELISA定量测定表达水平:转染后48h收集的上清EPO量为25ng/ml,72h为17ng/ml。
The recombinant expression vector pCSV-EPO of human erythropoietin was constructed by using gene recombination, PCR amplification, site-directed mutagenesis and translation optimization, and transient transcripts of EPO were obtained by transfection of the COS7 monkey cell line by DEAE-dextran method. EPO-ELISA quantitative determination of expression levels: 48h after transfection collected supernatant EPO amount of 25ng / ml, 72h of 17ng / ml.
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