牛IFN-γ原核表达、单克隆抗体制备及其ELISA检测方法的建立

来源 :生物工程学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：sunyanjun03

【摘要】

：

实验旨在建立牛重组IFN-γ（BovIFN-γ）的ELISA检测技术，为牛传染病的免疫学诊断提供新方法。PHA刺激体外培养的奶牛外周血白细胞，从培养细胞中提取总RNA，经过RT-PCR扩增出BovIFN-

【作者】

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李川谭亚娣陈颖钰胡巧云马艳张桂荣钦博晁彦杰陈

【机构】

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华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,华中农业大学动物医学院预防兽医学省重点实验室

【出处】

：

生物工程学报

【发表日期】

：

2007年1期

【关键词】

：

牛IFN-γ 单克隆抗体 ELISA 克隆表达 bovine IFN-γ （BovIFN-γ） monoclonal antibody ELISA cl

【基金项目】

：

武汉市科技攻关课题（No.20066002056）,国家“十五”科技攻关奶业重大专项（No.2002BA518A24）.

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实验旨在建立牛重组IFN-γ（BovIFN-γ）的ELISA检测技术，为牛传染病的免疫学诊断提供新方法。PHA刺激体外培养的奶牛外周血白细胞，从培养细胞中提取总RNA，经过RT-PCR扩增出BovIFN-γ基因cDNA，进一步克隆至pET28a，转化大肠杆菌，经IPTG诱导，表达出预期大小（18kD左右）组氨酸标记蛋白，经鉴定为BovIFN-γ；以纯化的重组BovIFN-γ为免疫原，应用淋巴细胞杂交瘤技术，获得4株能稳定分泌抗BovIFN-γ单克隆抗体的细胞株，分别命名为A7、A10、G6与G10。免疫球

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