血管平滑肌细胞中溶血磷脂酸受体mRNA表达含量的检测

来源 :中国组织工程研究与临床康复 | 被引量 : 0次 | 上传用户:waterlee1999
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背景:体内溶血磷脂酸存在3种受体,已有研究表明溶血磷脂酸受体1,2,3广泛分布于小鼠大脑皮质、肾脏的外髓层和内髓层、睾丸、胸腺、心脏、肺、胃、脾脏,而肝脏、小肠和骨骼肌分布较少,小鼠血管平滑肌细胞膜上是否存在多种溶血磷脂酸受体有待研究.目的:观察血管平滑肌细胞中溶血磷脂酸受体mRNA表达含量情况.设计:观察对比实验.单位:华中科技大学同济医学院.材料:选用24只C57BL/6小鼠,雌雄不限,7~8周龄,体质量(25±3)g左右,由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供.Trizol试剂购自美国Invitrogen公司;dNTP Mix、RNasin购自TaKaRa公司;M-MLV逆转录酶及缓冲系统购自Promega公司;Taq DNA聚合酶及缓冲系统购自Biostar公司;Oligo(dT)18引物购自上海生工.引物参照文献及核苷酸序列数据库设计,由上海生工合成.方法:实验于2005-08/2006-01在华中科技大学同济医学院综合实验室完成.20 g/L氯胺酮(5 mL/kg)腹腔麻醉小鼠,无菌操作取出胸主动脉段,采用贴壁法培养血管平滑肌细胞,实验用4~6代细胞,细胞纯度达95%以上.采用RT-PCR技术测定小鼠血管平滑肌细胞溶血磷脂酸3种受体基因的mRNA相对表达量.主要观察指标:小鼠血管平滑肌细胞溶血磷脂酸受体mRNA的相对表达量检测及受体种类的比较.结果:溶血磷脂酸受体1与溶血磷脂酸受体2在小鼠血管平滑肌细胞的表达量相近(P>0.05).溶血磷脂酸受体3在小鼠血管平滑肌细胞的表达量为(0.53±0.05),少于溶血磷脂酸受体1和溶血磷脂酸受体2(0.79±0.05,0.82±0.06,q=23.78,26.53,P<0.01).结论:血管平滑肌细胞存在3种溶血磷脂酸受体,溶血磷脂酸受体1与溶血磷脂酸受体2在小鼠血管平滑肌细胞的表达量没有差别,而溶血磷脂酸受体3在小鼠血管平滑肌细胞的表达量少.
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