【摘 要】
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Bm59是家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)的核心基因之一.利用λRed重组技术和Bac-to-Bac系统构建野生型病毒wtBacmid-polh-egfp、缺失型病毒Bm59
【机 构】
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浙江理工大学生物化学研究所,杭州310018;浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州310018;宁海县动物卫生监督所,浙江宁海,315600
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Bm59是家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)的核心基因之一.利用λRed重组技术和Bac-to-Bac系统构建野生型病毒wtBacmid-polh-egfp、缺失型病毒Bm59ko-Bacmid-polh-egfp以及补回型病毒Bm59re-Bacmid-polh-egfp,并分别转染家蚕卵巢培养细胞BmN,研究Bm59基因在病毒侵染、增殖和组装中的功能.对病毒滴度的检测结果表明3种类型病毒都能产生有活力的子代病毒并使细胞感染发病,但Bm59ko-Bacmid-polh-egfp在各个时相的滴度值均显著低于其他2种类型病毒(P＜0.05).电子显微镜下观察Bm59ko-Bacmid-polh-egfp转染的细胞中只有少量细长的杆状病毒粒子,而其他2种类型病毒转染细胞后则能产生大量具有囊膜包裹的成熟病毒粒子.qRT-PCR检测结果显示,Bm59缺失型病毒基因组DNA的复制能力显著降低(P＜0.05),早期基因lef-3、晚期基因vp39和极晚期基因p10的转录水平显著低于野生型病毒(P＜0.05).综上所述,Bm59基因虽然是家蚕核型多角体病毒复制的非必需基因,但会显著影响病毒的增殖速度和病毒粒子的组装,对病毒各个时期的基因转录水平具有下调作用.
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