【摘 要】
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目的 构建结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6-CFP21(CE21)融合蛋白的重组质粒,通过IFN-γ的检测探讨CE21在结核病检测中的价值.方法 通过聚合酶链式反应(PCR)扩增获得CFP21和CFP10-ES
【机 构】
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苏州大学基础医学与生命科学学院,同济大学附属上海市肺科医院/上海市结核病(肺)重点实验室
【基金项目】
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国家科技重大专项课题资助项目;上海市公共卫生重点学科建设项目;上海市科科资助项目
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目的 构建结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6-CFP21(CE21)融合蛋白的重组质粒,通过IFN-γ的检测探讨CE21在结核病检测中的价值.方法 通过聚合酶链式反应(PCR)扩增获得CFP21和CFP10-ESAT-6(CE)基因片段,分别连接到pMD18-T,并将两片段2次连接到表达载体pET21a(+)中,获得pET21a-CFP10-ESAT-6-CFP21重组质粒;经表达纯化和复性后,去除内毒素,利用酶联免疫吸附试验检测48例结核病患者、30例非结核肺部疾病患者及32例健康对照者全血中IFN-γ的释放量.结果 CE21经SDS-PAGE分析后相对分子质量为45,与预期大小一致.CE21融合蛋白全血标本IFN-γ的检测,结核组阳性率为72.9%,非结核疾病对照组和健康对照组阳性率 分别为3.3%和3.1%.结论 成功获得CE21融合蛋白,IFN-γ的检测证明该融合抗原具有良好的结核病检测价值.
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