【摘 要】
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为建立一种快速、准确检测流产嗜衣原体(C.abortus) TaqMan-MGB荧光定量PCR方法,本研究根据C.abortus主要外膜蛋白基因的特异保守序列设计引物及探针,并优化反应条件,建立了
【机 构】
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西南大学动物科技学院,重庆400715重庆出入境检验检疫局重庆市进出口食品安全工程中心,重庆400020;重庆出入境检验检疫局重庆市进出口食品安全工程中心,重庆400020;重庆大学生物工程学院,重庆
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为建立一种快速、准确检测流产嗜衣原体(C.abortus) TaqMan-MGB荧光定量PCR方法,本研究根据C.abortus主要外膜蛋白基因的特异保守序列设计引物及探针,并优化反应条件,建立了检测C.abortus的荧光定量PCR方法.结果表明,以重组质粒为标准品建立的标准曲线在1.6×103拷贝/μL～1.6× 107拷贝/μL内具有良好的线性关系,相关系数为0.9999.该方法仅对C.abortus的靶基因扩增呈阳性,而对鹦鹉热嗜衣原体、家畜嗜衣原体、鼠衣原体、沙眼衣原体、肺炎嗜衣原体、猪源衣原体核酸扩增结果均为阴性,特异性强;其最低检出限为1.6拷贝/μL;组内和组间重复性试验变异系数均小于3％,具有良好的重复性.利用建立的方法和普通PCR方法同时对225份临床样品进行检测,结果显示荧光定量PCR检出率比普通PCR高4.5％,表现较高的灵敏度和准确性.本研究建立的方法对C.abortus的临床鉴别检测和疾病诊断具有重要意义.
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