肠道病毒71型外壳蛋白VP2基因重组表达及活性鉴定

• 作 者: 黄学勇 刘国华 胡小宁 杜燕华 李幸乐 许玉玲 陈豪敏 许汴利
• 机 构: 450016郑州，河南省疾病预防控制中心传染病预防控制所,450016郑州，河南省疾病预防控制中心传染病预防控制所,郑州大学公共卫生学院流行病学教研室,450016郑州，河南省疾病预防控制中心传染病预
• 出 处: 中华预防医学杂志
• 发表日期: 2014年48期
• 关键词: 手足口病 肠道病毒属 抗原 DNA 重组

目的

克隆表达肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白VP2，鉴定重组蛋白免疫活性，为EV71血清学检测试剂和疫苗研究提供依据。

方法

利用PCR技术从EV71/Henan/106/2009河南分离株基因组扩增VP2基因，经酶切连接到表达载体pMAL–c2X中，转化大肠杆菌(E.coli TB1)；用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因表达，并对重组蛋白进行纯化，SDS–PAGE和Western blotting方法对重组蛋白分析鉴定其免疫活性；建立ELISA检测EV71 IgM抗体方法，检测手足口病患儿急性期中和抗体阳性血清60份，其中阳性52份，阴性8份；检测临床诊断手足口病患儿急性期血清标本88份。

结果

PCR方法扩增的VP2基因长度约为762 bp；经酶切鉴定插入到表达载体的基因片段与预期目的片段相一致；SDS–PAGE结果显示表达产物相对分子质量约为71 500；经大肠杆菌高效表达和纯化获得了重组蛋白EV71–VP2，通过Western blotting分析，该重组蛋白与手足口病患者血清反应产生特异杂交带；建立ELISA检测方法的灵敏度为87%，特异度为83%。在临床诊断的88份手足口病患儿急性期血清标本中，抗EV71–IgM阳性48份，阳性率为55%。

结论

本研究成功克隆并构建了EV71 VP2基因高效原核表达系统，初步结果显示重组蛋白具有较好的抗原性，为EV71诊断试剂的研究奠定了基础。