【摘 要】
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扩增PDC1全长和Kan基因,构建带有Kanr和Ampr的整合表达载体pSH-PDC1,线性化后LiAc/SS Carrier DNA/PEG法高效转化酿酒酵母YS2-△adh2-△ald6.G418结合PCR筛选获得阳性转化子,
【机 构】
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福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院; 莆田学院环境与生命科学系;
【基金项目】
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现代农业产业技术体系建设专项资金(nycytx-024-01-20);公益性行业(农业)科研专项(nyhyzx07-019);农业部“948”项目(2006-G37)资助~~
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扩增PDC1全长和Kan基因,构建带有Kanr和Ampr的整合表达载体pSH-PDC1,线性化后LiAc/SS Carrier DNA/PEG法高效转化酿酒酵母YS2-△adh2-△ald6.G418结合PCR筛选获得阳性转化子,然后转入pSH65质粒,半乳糖诱导表达Cre酶切除Kan基因,获得PDC1过表达菌株.荧光定量PCR分析表明过表达菌株PDC1的mRNA表达量是出发菌株的2.078倍,遗传性能稳定,生长情况与出发菌株无明显差异.发酵试验显示过表达菌株蔗糖消耗速率较出发菌株缓慢,乙醇最大积累量为72 h的12.03%,提高了5.62%.利用同源重组原理和Cre-LoxP系统,成功构建PDC1基因过表达突变株并提高了乙醇产量.
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