【摘 要】
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从水牛瘤胃内容物的添加滤纸为碳源的富集培养物中提取未培养微生物的总DNA,以柯斯质粒为载体构建了1个含约8000个克隆的宏基因组文库,对文库进行活性筛选获得1个既表达CMCas
【机 构】
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广西大学生命科学与技术学院广西大学生命科学与技术学院广西亚热带生物资源保护利用重点实验室广西南宁广西亚热带生物资源保护利用重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(30560003),, 教育部新世纪优秀人才支持计划项目(NCET-05-0752),, 广西科技攻关计划项目(桂科攻0630003-7)
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从水牛瘤胃内容物的添加滤纸为碳源的富集培养物中提取未培养微生物的总DNA,以柯斯质粒为载体构建了1个含约8000个克隆的宏基因组文库,对文库进行活性筛选获得1个既表达CMCase活性又表达4-MUCase酶活性的克隆。亚克隆及测序分析发现1个潜在的可编码333个氨基酸的ORF(Open Reading Frame),其蛋白质产物与1个来源于未培养细菌的糖苷水解酶家族5的纤维素酶Cel A的同源性最高,两者的一致性为53%,相似性为68%。将PCR扩增的该基因完整的ORF克隆入表达载体pET30a(+),在
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