【摘 要】
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目的 筛选并鉴定可用于实验室快速检测副溶血性弧菌的适配体序列.方法 利用全菌SELEX技术,通过人工合成全长86 bp、中间含40 bp随机核苷酸序列的单链DNA文库,筛选与副溶血性
【机 构】
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杭州市疾病预防控制中心,浙江,310021
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目的 筛选并鉴定可用于实验室快速检测副溶血性弧菌的适配体序列.方法 利用全菌SELEX技术,通过人工合成全长86 bp、中间含40 bp随机核苷酸序列的单链DNA文库,筛选与副溶血性弧菌高效结合的适配体,对候选适配体序列进行特异性分析,并评估其二级结构和Kd值.结果 第4轮筛选即出现比较明显的产物富集,继续筛选至第12轮结束.经克隆和测序后得到5条候选适配体序列(F2、F5、F6、F19、F30),它们与副溶血性弧菌的结合率分别为68.8％,68.8％,73.1％,65.2％和72.7％;特异性实验显示,5条候选适配体均能与副溶血性弧菌高效结合,与5种其它常见致病菌则结合不明显;用DNA folding form对5条候选核酸适配体序列进行二级结构模拟,结果显示,其二级结构以茎环(凸环和圆环)为主,茎环结构中的茎多南G-C配对组成;采用荧光分析法对5条候选适配体的Kd值进行分析测定,其对靶细菌的解离常数分别为15.88、15.24、9.13、4.12和25.39 nM.结论 全菌SELEX技术可用于副溶血性弧菌适配体筛选,5条候选适配体与靶细菌结合力强,特异性高.
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