【摘 要】
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目的 探索阿奇霉素/鼠李糖脂自组装纳米粒(AZI-RHL NPs)在体外对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa)生物被膜的清除作用.方法 制备并表征AZI-RHL NPs.采用微
【基金项目】
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国家自然科学基金(No.81973264、No.81773659),广东省自然科学基金(No.2019A1515011954、No.2021A1515012621)资助。
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目的 探索阿奇霉素/鼠李糖脂自组装纳米粒(AZI-RHL NPs)在体外对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa)生物被膜的清除作用.方法 制备并表征AZI-RHL NPs.采用微量肉汤稀释法测定AZI-RHL NPs对游离P.aeruginosa的最低抑菌浓度(MIC).采用结晶紫染色法和SYTO 9/PI死活菌染色法评价AZI-RHL NPs对生物被膜的清除作用.采用荧光标记法探究NPs对生物被膜胞外聚合物(EPS)的清除作用.通过结晶紫染色法观察NPs对P.aeruginosa在人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)黏附中的抑制作用.通过测定NPs与黏蛋白溶液孵育后的粒径变化考察其与黏蛋白的相互作用,以推测其黏液穿透能力.结果 AZI-RHL NPs的粒径约为(121.4±6.0)nm,表面带负电,具有高包封率高载药量,对AZI的包封率为96.72％,载药量为45.08％,对RHL的包封率为99.38％,载药量为53.07％.AZI-RHL NPs对游离P.aeruginosa的MIC是AZI组的一半.AZI-RHL NPs可有效破坏生物被膜的结构,去除EPS中的蛋白质和多糖,在清除生物被膜的同时降低膜内细菌存活率,并抑制P.aeruginosa在BEAS-2B细胞上的黏附,避免残余细菌形成新的生物被膜.与黏蛋白溶液共孵育后NPs粒径无明显变化,提示NPs与黏蛋白相互作用较弱,推测其可穿透黏液到达P.aeruginosa感染部位.结论 AZI-RHL NPs通过“穿透黏液-破坏生物被膜-杀死膜内细菌-抑制残余细菌再黏附”的“除膜四部曲”策略,有效提高了P.aeruginosa生物被膜的清除,为治疗包括P.aeruginosa在内的由生物被膜引起的顽固性感染提供了一种可复制的通用型策略.
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