【摘 要】
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目的观察吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂1-甲基色氨酸(1-MT)联合外周血单个核细胞(PBMC)对人胶质瘤细胞A172的免疫杀伤作用。方法采用Ficoll密度梯度离心分离健康人外周血制备PBMC,根据是否联合1-MT分组。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测梯度1-MT(0、25、125、250、500μmol/L;1、2、4、8、10 mmol/L)联合PBMC对A172细胞存活率影响。
【机 构】
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510182广州医科大学;深圳市第二人民医院(深圳大学第一附属医院)神经外科;神经外科重点实验室,深圳市第二人民医院(深圳大学第一附属医院)神经外科;神经外科重点实验室,深圳市第二人民医院(深圳大学第
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目的观察吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂1-甲基色氨酸(1-MT)联合外周血单个核细胞(PBMC)对人胶质瘤细胞A172的免疫杀伤作用。
方法采用Ficoll密度梯度离心分离健康人外周血制备PBMC,根据是否联合1-MT分组。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测梯度1-MT(0、25、125、250、500μmol/L;1、2、4、8、10 mmol/L)联合PBMC对A172细胞存活率影响。1-MT (500μmol/L)联合PBMC与A172细胞共培养,流式双染术检测A172细胞凋亡率,Western blot检测A172细胞IDO蛋白表达,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测PBMC中调节T细胞叉头样螺旋转录因子(Foxp3)mRNA表达。
结果在PBMC数量一定情况下,1-MT呈剂量依赖性抑制A172细胞存活率;1-MT联合PBMC组细胞凋亡比率(45.0%)显著高于PBMC组(20.0%)及1-MT组(33.7%);PBMC组A172细胞IDO蛋白相对表达量(0.313±0.017)明显高于1-MT联合PBMC组(0.182±0.015,P< 0.01),1-MT、A172空白组未见明显IDO蛋白表达;PBMC组PBMC 中Foxp3 mRNA表达(2.764±0.180)明显高于1-MT联合PBMC组(2.189±0.179,P< 0.05)及PBMC空白组(1.000±0.028,P< 0.01),1-MT联合PBMC组明显高于PBMC空白组(P< 0.01)。
结论1-MT可抑制IDO表达,下调PBMC中Foxp3转录因子表达,降低调节性T细胞增殖分化,可增强PBMC对胶质瘤细胞免疫杀伤作用。
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