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目的 探讨以腺相关病毒(AAV)为载体对体外培养牛眼虹膜色素上皮细胞(IPECs)进行胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)转染,获得高效表达GDNF转基因细胞的可行性. 方法采用狭隙杂交测定AAV-GDNF的滴度,按感染复数(MOI)为50对传二代IPECs进行AAV-GDNF转染,于含3%胎牛血清DMEM培养基中连续不换液培养4周,酶联免疫吸附测定(ELISA)细胞培养上清液中GDNF的量.同样方法对传二代IPECs进行AAV介导的绿色荧光蛋白(GFP)基因转染,于含20%胎牛血清DMEM培养基中进行常规细胞培养.荧光显微镜下每2 d计数1次培养IPECs的GFP表达阳性率. 结果 (1)AAV-GFP转染后,IPECs生长正常,于转染后4 d部分IPECs开始出现GFP表达.GFP的表达在荧光显微镜490 nm波长激发光下呈黄绿色,弥漫于整个胞质.转染8～10 d后,IPECs中GFP的表达至高峰.(2)根据ELISA检测结果、经过计算,AAV-GDNF转染IPECs的培养上清液中GDNF的含量为(17.14±1.10) μg/L. 结论 AAV-GDNF能有效地转染体外培养的IPECs和表达GDNF。