带FLAG标签小鼠HuR真核表达载体的构建及其生物学功能的鉴定

• 作 者: 李涛 于文燕 欧小利 刘爱华 梅柱中 姜勇
• 机 构: 南方医科大学病理生理学教研室、广东省蛋白质组学重点实验室,南方医科大学南方医院呼吸科
• 出 处: 解放军医学杂志
• 发表日期: 2011年4期
• 关键词: 人抗原R 基因表达 基因转录后调控 human antigen R； gene expression； posttranscriptional regulati

目的构建人抗原R（HuR）的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达并初步分析其生物学功能。方法提取NIH3T3细胞总RNA并反转录为cDNA,以cDNA为模板PCR扩增得到小鼠HuR编码序列,酶切后克隆至pcDNA3.1-FLAG载体;重组载体经PCR、酶切、测序鉴定正确后瞬时转染NIH3T3细胞,采用Western blotting分析HuR在细胞中的表达,并采用Real-time PCR检测HuR过表达对DUSP1mRNA水平的影响。结果成功构建了重组质粒pcDNA3.1-HuR-FLAG,W