慢病毒载体介导下DJ-1过表达细胞模型的建立

• 作 者: 任静 李毅 杨慧 鲁玲玲
• 机 构: 首都医科大学基础医学院神经生物学系北京脑重大疾病研究院帕金森病研究所教育部神经变性病重点实验室
• 出 处: 基础医学与临床
• 发表日期: 2018年1期
• 关键词: 帕金森病 DJ-1 PC12细胞 慢病毒载体 Parkinson＇ s disease D J- 1 PC 12 cell lentivirus vect
• 基金项目: 国家重点研究发展计划（2016YFC1306002）, 国家自然科学基金（81371398,81371200）, 北京市自然科学基金（7131001）, 北京市创新团队建设提升计划（IDHT20140514）, 北京市教育委员会科技发展计划（KM201710025001）

目的构建人野生型DJ-1及其L166P突变体的慢病毒载体并探讨慢病毒载体在构建基因过表达细胞模型中的作用。方法分别构建野生型DJ-1与L166P突变型DJ-1慢病毒载体质粒。进行测序确定比对正确后,进行质粒的大量扩增与制备并转染包装细胞系HEK293T细胞,荧光法和Western blot检测野生型DJ-1与L166P突变型DJ-1在细胞系中的表达。在确定目的蛋白正确表达之后,大量转染HEK293T细胞进行包装并生产携带目的基因的慢病毒颗粒。测定病毒上清滴度后感染PC12细胞,荧光显微镜和Western