5-酮戊二酸(ALA)联合二价铁离子体外诱导小鼠骨髓来源调节性树突状细胞的培养及鉴定

• 作 者: 张琦 蔡松洁 刘亚婷 侯剑刚
• 机 构: 200040 上海，复旦大学附属华山医院皮肤科；200040 上海市皮肤病研究所,02115 美国波士顿马萨诸塞州哈佛大学医学院伯列跟女子医院肾脏内科移植研究中心,200040 上海，复旦大学附属华山
• 出 处: 中华器官移植杂志
• 发表日期: 2018年39期
• 关键词: 5-酮戊二酸 树突状细胞 小鼠

目的

探讨由5-酮戊二酸(ALA)联合二价铁离子(SFC)诱导调节性树突状细胞(DCreg)的方法并从其细胞形态、免疫表型、功能对其进行鉴定。

方法

无菌条件下取C57BL/6小鼠的骨髓细胞，按体外诱导培养的培养体系不同，将其分为2组：传统DC(conventional dendritic cell, DCcon)组，用含重组鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)10ng/ml，重组鼠白细胞介素-4(rmIL-4)10 ng/mL的RPMI 1640培养基诱导培养7 d；ALA-DCreg组，用含rmGM-CSF 20 ng/ml，5-ALA 1mmol/L ＋ SFC 0.5 mmol/L的RPMI 1640培养基培养7 d。显微镜下及细胞涂片观察细胞形态；通过流式细胞术检测细胞表面分子；通过体外混合淋巴细胞培养实验以及体内的细胞增殖实验来检测细胞功能。

结果

ALA-DCreg在形态上具有树突状细胞的特征；细胞表面高表达CD11b、CD11c双阳性分子，与DCcon一致；与DCcon具有同样高表达的第一信号MHCII分子，但第二信号分子CD40、CD80、CD86的表达显著低于DCcon；体内、外两种细胞增殖实验均显示ALA-DCreg具有抑制效应T细胞活化增殖的能力。

结论

ALA/SFC可成功诱导小鼠骨髓细胞向DCreg分化。