3D打印Ti6Al4V-4Cu合金通过骨免疫调节促进成骨基因的表达

来源 :中国修复重建外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aspoptyy4
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目的 探究3D打印Ti6Al4V-4Cu合金对小鼠BMSCs及小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7炎症及成骨基因表达的影响.方法 通过选择性激光熔融技术制备Ti6Al4V与Ti6Al4V-4Cu合金,依据医疗器械生物学评价标准制备两种材料浸提液.通过细胞计数试剂盒8法检测两种浸提液对小鼠BMSCs、小鼠RAW264.7细胞增殖的影响.两种浸提液与小鼠BMSCs共培养3d后,通过实时荧光定量PCR法检测成骨相关基因Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,Col-Ⅰ)、ALP、Runx家族转录因子2(Runx family transcription factor 2,Runx-2)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)mRNA的表达;与小鼠RAW264.7共培养1d后,通过实时荧光定量PCR法检测炎症相关基因IL-4、一氧化氮合成酶2(nitric oxide synthase 2,iNOS) mRNA的表达,并收集两组上清液通过ELISA法检测其中VEGF-a、BMP-2的分泌量.将两组上清液制备成成骨条件培养基,与BMSCs共培养3d,实时荧光定量PCR法检测成骨相关基因Col-Ⅰ、ALP、Runx-2、OPG、OPN mRNA的表达.结果 与Ti6Al4V合金浸提液比较,Ti6Al4V-4Cu合金浸提液对BMSCs及小鼠RAW264.7细胞的增殖影响不明显;但是可促进BMSCs OPG mRNA的表达,减少小鼠RAW264.7细胞炎症相关基因iNOS mRNA的表达、促进抑炎因子IL-4 mRNA的表达,还可促进小鼠RAW264.7细胞分泌VEGF-a及BMP-2,而Ti6Al4V-4Cu成骨条件培养基又可促进BMSCs成骨相关基因Col-Ⅰ、ALP、Runx-2、OPG、OPN mRNA的表达,上述指标差异均有统计学意义(P<0.05).结论 3D打印Ti6Al4V-4Cu合金通过释放铜离子,促进RAW264.7细胞分泌VEGF-a及BMP-2,从而通过骨免疫调节促进成骨发生,为金属假体的应用奠定了理论基础.
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