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目的：建立反相高效液相色谱法测定血清中氨甲喋呤浓度的方法。方法：以甲醇：醋酸盐缓冲液为流动相，茶碱作内标，检测波长为３０６ｎｍ。。结果：在０～８μｇ．ｍｌ＾－１内呈良好线性关系，ｒ＝０．９９９９。日内及日间测得ＲＳＤ分别为３．６６％，４．０３％。平均回收率为９５．７％，血清中最低检测浓度为５０ｎｇ．ｍｌ＾－１。结论：本法具有快速、准确，操作简便，流动相成本低等优点。